目的 探讨间充质干细胞(MSCs)来源的外泌体(Exos)中miR-143-3p调控自噬并逆转心肌缺血再灌注(I/R)损伤的机制.方法 分别将miR-143-3p NC、miR-143-3p mimic转染到MSCs.从MSCs提取Exos,将Exos与H9c2细胞共培养,进行缺氧/复氧(H/R)处理,分为H/R组(不转染)、MSC组(只加入Exos)、miR-143-3p-NC组(加入Exos miR-143-3p-NC)、miR-143-3p mimic组(加入Exos miR-143-3p mimic).将处理过的H9c2细胞注射到大鼠心肌组织,25只大鼠随机分为5组,即对照组、H/R 组、MSC 组、miR-143-3p-NC 组、miR-143-3p mimic 组.RT-PCR 检测细胞 miR-143-3p 表达;Western blot 检测兔抗人自噬相关蛋白3B-Ⅰ(LC3B-Ⅰ)、自噬相关蛋白3B-Ⅱ(LC3B-Ⅱ)及p62蛋白;透射电子显微镜、纳米颗粒示踪分析技术(NTA)及PKH-26标记Exo示心肌细胞摄取能力;自噬双标腺病毒(mRFP-GFP-LC3)实验检测自噬流;酶联免疫反应法测定大鼠血清心肌肌钙蛋白Ⅰ(cTnI)、肌酸磷酸激酶(CK)含量;2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色检测心肌梗死面积;脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)染色检测心肌细胞凋亡.结果 H/R组H9c2细胞自噬流高于对照组,MSC组细胞自噬流低于H/R组,差异均有统计学意义(P＜0.01).H/R组细胞LC3B-Ⅱ与LC3B-Ⅰ比值(LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ)高于对照组,p62表达量低于对照组,差异有统计学意义(P＜0.01).MSC组细胞LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ低于对照组、H/R组,p62表达量高于对照组、H/R组,差异有统计学意义(P＜0.01).MSCs-Exos中miR-143-3p表达水平为(1.6±0.2),高于MSCs的(0.9±0.1),差异有统计学意义(P＜0.01).H/R组H9c2细胞miR-143-3p水平为(0.32±0.03),低于对照组H9c2细胞的(1.02±0.09),差异有统计学意义(P＜0.01);与H/R组比较,MSC组、miR-143-3p mimic组细胞miR-143-3p水平升高,差异有统计学意义(P＜0.01).miR-143-3p mimic组细胞LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ低于MSC组、miR-143-3p-NC组,p62表达量高于MSC组、miR-143-3p-NC组,差异有统计学意义(P＜0.01).H/R组大鼠心肌组织梗死面积、凋亡率、cTnI及CK水平高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.01);MSC组大鼠心肌组织梗死面积、凋亡率、cTnI及CK水平低于H/R组,差异有统计学意义(P＜0.01);miR-143-3p mimic组大鼠心肌组织梗死面积、凋亡率、cTnI及CK水平低于MSC组、miR-143-3p-NC组,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 MSCs-Exos来源的miR-143-3p可通过调控自噬减轻心肌I/R损伤.

间充质干细胞;外泌体;miR-143-3p;自噬;心肌缺血再灌注损伤

新疆医科大学第七附属医院重症医学科,新疆乌鲁木齐,830028

[1]胡珍艳;尕永梅;麦迪乃姆·努尔麦麦提-.间充质干细胞来源的外泌体中miR-143-3p抑制自噬并逆转心肌缺血再灌注损伤的机制研究)[J].实用临床医药杂志,2022(17):46-52

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