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靶向小鼠ATP7B基因的CRISPR/Cas9系统构建与评价
文献摘要：
目的 使用CRISPR/Cas9系统靶向小鼠ATP7B基因,建立高效的ATP7B基因CRISPR/Cas9编辑系统,模拟人ATP7B基因突变,为更深入地开展威尔逊病(WD)分子机制研究和疾病干预奠定基础.方法 选择我国WD的热点突变,对应小鼠ATP7B基因上的突变区域,设计单向导RNA(sgRNA),构建表达质粒,并与Cas9表达质粒共转染到小鼠N2a细胞,采用药物(嘌呤霉素和杀稻瘟菌素)筛选阳性细胞并提取gDNA,将目标位点的DNA片段进行聚合酶链式反应(PCR)扩增,然后通过TA克隆序列结果分析对目标基因的打靶效率.结果 成功设计sgRNAs序列,并使用CRISPR/Cas9系统编辑了小鼠ATP7B基因,编辑效率为53.85％,创建了ATP7B基因突变细胞模型.结论 通过靶向小鼠ATP7B基因,成功构建CRISPR/Cas9系统,这对深入研究WD的致病机制、探讨WD的治疗具有重要意义.
文献关键词：
基因编辑;CRISPR/Cas9;单向导RNA;ATP7B;威尔逊病
中图分类号：
作者姓名：
李欣怡;孙雪梅;付灿;岳鹏鹏;于鸿浩;李勇
作者机构：
桂林医学院生物技术学院,广西 桂林 541199
文献出处：
引用格式：
[1]李欣怡;孙雪梅;付灿;岳鹏鹏;于鸿浩;李勇-.靶向小鼠ATP7B基因的CRISPR/Cas9系统构建与评价)[J].现代医药卫生,2022(11):1801-1805,1811
A类：
B类：
ATP7B,CRISPR,Cas9,系统构建,构建与评价,拟人,基因突变,威尔逊病,WD,热点突变,向导,建表,质粒,共转染,N2a,嘌呤霉素,稻瘟菌,菌素,阳性细胞,gDNA,目标位,聚合酶链式反应,TA,打靶,sgRNAs,统编,编辑效率,变细,细胞模型,致病机制,基因编辑
AB值：
0.341058
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