目的:探讨雌激素处理人骨髓间充质干细胞(hBMSC)对高糖诱导的人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)损伤的保护作用及机制.方法:采用30 mmol/L葡萄糖刺激hBMSC细胞建立高糖模型并分组:以无刺激者为高糖对照组(HG组)、以20 μmol/L雌激素处理者为高糖雌激素组(HG+E2组)、以5 μmo/L蛋白激酶B(PKB/Akt)抑制剂Triciribine预处理45 min后,再以20 μmol/L雌激素处理者为高糖Akt抑制剂组(HG+E2+Triciribine组)和正常条件培养的hBMSC为正常对照组(NG组).分别于处理12 h后,采用CCK8法检测各组hBMSC的细胞活力,硝酸还原酶法和ELISA法检测各组培养基上清中NO、VEGF和IL-8的含量(n=6),48 h后采用Western blot检测内皮型一氧化氮合酶(eNOS)和磷酸化eNOS(p-eNOS)蛋白表达水平(n=3).此外,提取各组hBMSC的培养基上清作为条件培养基(CM)培养人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)并分组为:HG-CM组(HG组条件培养基处理)、HG+E2-CM组(HG+E2组条件培养液处理)、HG+E2+Triciribine-CM组(HG+E2+Triciribine组条件培养基处理)和HG-H组(高糖对照组,30 mmol/L葡萄糖终浓度处理),分别于12 h后,采用CCK8法检测各组HUVEC的细胞活力(n=6),24 h后采用流式细胞术检测各组HUVEC细胞的凋亡率(n=3);48 h后采用划痕实验观察各组HUVEC细胞的迁移率(n=3).结果:与NG组相比,HG组中hBMSC细胞活力和细胞内eNOS蛋白磷酸化水平降低(P＜0.05),细胞培养液上清中NO、VEGF和IL-8含量减少(P＜0.05);与HG组相比,HG+E2组中hBMSC的细胞活力和细胞中eNOS蛋白磷酸化水平显著增加(P＜0.05),细胞培养基上清中NO、VEGF和IL-8含量增加(P＜0.05),而当hBMSC细胞中Akt蛋白活性被抑制后,HG+E2+Triciribine组中上述结果指标呈反向变化(P＜0.05).此外,与HG-CM组相比,HG+E2-CM组中HUVECs的细胞活力和迁移能力显著增加(P＜0.05),细胞凋亡比例降低(P＜0.05),而与HG+E2-CM组相比,HG+E2+Triciribine-CM组中HUVECs的细胞活力和迁移能力降低(P＜0.05),细胞凋亡比例增加(P＜0.05).结论:雌激素可能通过激活hBMSC细胞Akt/eNOS信号通路,促进NO、VEGF和IL-8的分泌,进而增加HUVECs的细胞活力和迁移能力,并抑制细胞凋亡的发生,对高糖诱导的HUVECs细胞损伤发挥保护作用.

雌激素;人骨髓间充质干细胞;细胞损伤;高糖条件;人脐静脉血管内皮细胞;细胞培养

张晓东;孙石磊;王冠;李霄凌;姚立杰;徐浩;张鹏;沈雷

黑龙江省齐齐哈尔医学院解剖学教研室,齐齐哈尔161006;北京市首都医科大学组织胚胎学系,北京100069;上海复旦大学基础医学院人体解剖与组织胚胎学系,上海200433;黑龙江省齐齐哈尔医学院基础医学院,齐齐哈尔161006

中国应用生理学杂志

[1]张晓东;孙石磊;王冠;李霄凌;姚立杰;徐浩;张鹏;沈雷-.雌激素处理的hBMSC对高糖诱导血管内皮细胞损伤的保护作用)[J].中国应用生理学杂志,2022(04):289-294

HG+E2,Triciribine,HG+E2+Triciribine

雌激素,激素处理,hBMSC,高糖诱导,血管内皮细胞损伤,人骨髓间充质干细胞,人脐静脉血管内皮细胞,处理者,蛋白激酶,PKB,Akt,再以,正常对照,NG,CCK8,细胞活力,硝酸还原酶,酶法,组培,上清,VEGF,blot,内皮型一氧化氮合酶,eNOS,蛋白表达水平,条件培养基,CM,条件培养液,流式细胞术,凋亡率,划痕实验,实验观察,迁移率,蛋白磷酸化,平降,细胞培养,蛋白活性,结果指标,HUVECs,迁移能力,高糖条件

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