目的:研究知母皂苷A-Ⅲ(timosaponin A-Ⅲ,TAⅢ)对非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)生长的影响及其作用机制.方法:采用不同浓度TAⅢ(5、10、15、20、25、30μmol/L)处理非小细胞肺癌细胞A549,使用CCK8法检测细胞活力.以定量逆转录聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测二磷酸腺苷核糖化因子鸟苷酸激酶1-内含子转录因子1(adenosine diphosphate ribosylation factor guanylate kinase 1-intronic transcript 1,ASAP1-IT1)、Yes相关蛋白1(Yes-associated protein 1,YAP1)在组织及细胞中的表达.以EDU、流式细胞术和Western blot检测ASAP1-IT1、DNA(胞嘧啶-5-)-甲基转移酶3β(DNA(cytosine-5-)-methyltrans-ferase 3 beta,DNMT3b)、YAP1对细胞增殖情况、细胞凋亡率及其相关基因(Bax和caspase-3)与抗凋亡基因Bcl2的影响.亚硫酸氢盐测序聚合酶链式反应(Bisulfite sequencing PCR,BSP)分析检测ASAP1-IT1与YAP1的关系.RNA免疫沉淀法(RNA binding protein immunoprecipitation,RIP)和qRT-PCR法检测ASAP1-IT1与DNMT3 b之间的相互作用.免疫共沉淀实验(Co-im-munoprecipitation,Co-IP)检测DNMT3b与YAP1之间的关系.采用qRT-PCR方法检测TAⅢ对ASAP1-IT1/DNMT3 b/YAP1轴相关基因表达的影响.结果:ASAP1-IT1和YAP1在NSCLC组织和A549细胞中表达上调,而DNMT3b表达下调,加入TAⅢ可逆转这些效应.沉默ASAP1-IT1和YAP1、过表达DNMT3b或应用TAⅢ可增加A549细胞凋亡率和细胞凋亡相关指数.TAⅢ有逆转沉默或过表达ASAP1-IT1、DNMT3 b和YAP1的作用.最后发现ASAP1-IT1与DNMT3 b相互作用,而DNMT3 b与YAP1相互作用.结论:ASAP1-IT1/DNMT3 b/YAP1轴通过调节细胞增殖和凋亡促进NSCLC进展.TAⅢ通过调节ASAP1-IT1/DNMT3b/YAP1轴抑制肺癌细胞增殖,促进其凋亡.

二磷酸腺苷核糖化因子鸟苷酸激酶1-内含子转录因子1;Yes相关蛋白1;非小细胞肺癌;知母皂苷A-Ⅲ

付相君;王梅;张远;李艳娜;耿彪;赵文英

皖南医学院,安徽 芜湖241002;皖南医学院第一附属弋矶山医院

包头医学院学报

[1]付相君;王梅;张远;李艳娜;耿彪;赵文英-.知母皂苷A-Ⅲ调控ASAP1-IT1/DNMT3b/YAP1轴在非小细胞肺癌中的作用机制研究)[J].包头医学院学报,2022(11):10-17,33

timosaponin,Bisulfite,munoprecipitation

知母皂苷,ASAP1,IT1,DNMT3b,YAP1,TA,small,cell,lung,cancer,NSCLC,非小细胞肺癌细胞,A549,CCK8,细胞活力,以定,逆转录聚合酶,聚合酶链式反应,qRT,二磷酸腺苷,核糖,糖化,鸟苷酸,内含子,adenosine,diphosphate,ribosylation,guanylate,kinase,intronic,transcript,Yes,associated,protein,EDU,流式细胞术,blot,胞嘧啶,甲基转移酶,cytosine,methyltrans,ferase,beta,细胞凋亡率,Bax,caspase,抗凋亡,凋亡基因,Bcl2,亚硫酸氢盐,sequencing,BSP,分析检测,免疫沉淀法,binding,immunoprecipitation,RIP,免疫共沉淀,Co,相关基因表达,过表达,增殖和凋亡,凋亡促进

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