目的:构建敲低、过表达人NCOA4基因的慢病毒载体,建立敲低、过表达NCOA4的HFL1稳转株,为研究NCOA4介导的铁死亡在肺部疾病中的作用提供一个细胞模型.方法:设计NCOA4的shRNA并插入pLKO.1载体;获取人NCOA4全基因组序列并插入pCDH载体.DNA测序验证载体目的基因序列.慢病毒包装载体共转染293T细胞,包装病毒并感染HFL1,使用Western Blot、qPCR检测其敲低、过表达效果.结果:本研究成功构建了NCOA4敲低、过表达慢病毒载体.慢病毒感染人HFL1细胞后,得到敲低、过表达NCOA4基因的HFL1稳转株.结论:成功获取了稳定敲低、过表达NCOA4的HFL1的细胞株,为研究NCOA4介导的铁死亡在肺部疾病中的作用和机制奠定了基础.

NCOA4;HFL1;慢病毒载体;铁死亡;肺部疾病

复旦大学 生命科学学院,上海 200438

[1]黄德林;陈雅慧;凡志婷;石祥广;黄炎;王少辉;王久存;姜帅-.敲低、过表达NCOA4慢病毒包装及稳转HFL1细胞株构建)[J].生物化工,2022(04):1-5

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