[背景]N6-甲基腺苷(m6A)RNA甲基化修饰在环境致癌物诱发细胞恶性转化的过程中发挥着重要作用,但其作用及机制有待进一步探索.[目的]探究m6A结合蛋白中胰岛素样生长因子2 mRNA结合蛋白3(IGF2BP3)在N-甲基-N'-硝基-N-亚硝基胍(MNNG)致人胃黏膜上皮细胞GES-1恶性转化细胞中的作用及机制.[方法]基于MNNG致GES-1恶性转化细胞模型MC-30,应用转染慢病毒技术构建稳定敲低IGF2BP3 的 MC-30 细胞株(MC30-shIGF2BP3,简写 MC30-shl3),并设置阴性对照组(MC30-NC).实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)和Western blotting实验分别检测IGF2BP3 mRNA和蛋白表达水平,RNA结合蛋白免疫沉淀技术(RIP-qPCR)验证恶转细胞MC-30中IGF2BP3蛋白与MYCmRNA的结合,放线菌素D实验检测MYCmRNA的稳定性.CCK-8、Transwell分别检测细胞增殖、迁移和侵袭能力,Western blotting实验检测EMT关键蛋白(N-cadherin、Vimentin、α-SMA、Snail)的表达.通过在MC30-shl3细胞中转染质粒过表达MYC的挽救实验,进一步观察细胞表型(增殖、迁移、侵袭)和EMT关键蛋白表达的变化来阐明下游靶基因MYC的作用.[结果]与对照组相比,5、10、20、40 μmol·L-1 MNNG染毒GES-1细胞后,/GF2BP3 mRNA表达均上调(P＜0.05).20 μmol·L-1 MNNG染毒GES-1细胞后,IGF2BP3 mRNA表达水平随染毒时间的延长呈上调趋势(P＜0.05).5 μmol·L-1 MNNG恶转第10、20、30代IGF2BP3 mRNA和蛋白表达水平均上调(P＜0.05).qRT-PCR 和 Western blotting 表明,与 MC30-NC 组相比,MC30-shl3组的细胞IGF2BP3 mRNA表达和蛋白表达水平明显下调(P＜0.01);CCK8、Transwell表明,与MC30-NC组相比,MC30-shl3组的细胞增殖、迁移以及侵袭能力明显降低(P＜0.01);Western blotting 实验表明,与 MC30-NC 组相比,MC30-shl3 组的 EMT 关键蛋白 N-cadherin、Vimentin、α-SMA、Snail蛋白表达水平均明显下调(P＜0.01);RIP-qPCR结果显示,在MC-30细胞中,与IgG组相比,IGF2BP3组中富集的MYC的mRNA水平更高(P＜0.01);放线菌素D实验表明,与MC30-NC组相比,MC30-shl3组MYCmRNA的稳定性明显降低(P＜0.01).挽救实验表明,与IGF2BP3敲低+质粒空载体组相比,IGF2BP3敲低+过表达MYC组的细胞MYC蛋白水平明显升高(P＜0.01),细胞增殖、侵袭以及迁移能力均明显增强(P＜0.01),EMT关键蛋白(N-cad-herin、Vimentin、α-SMA、Snail)的蛋白表达水平均明显升高(P＜0.01).[结论]MNNG暴露可导致GES-1细胞中IGF2BP3表达上调;IGF2BP3可能通过与MYC mRNA相结合并增强其稳定性,增加其表达水平从而促进EMT进程,进而增强人胃上皮细胞恶性转化细胞的增殖、迁移和侵袭能力,影响恶性转化的进程.

N-甲基-N’-硝基-N-亚硝基胍;胰岛素样生长因子2 mRNA结合蛋白3;GES-1细胞;恶性转化;上皮间质转化

任艺艺;杜丹丹;刘桐;尹立红;浦跃朴;梁戈玉

东南大学,公共卫生学院/环境医学工程教育部重点实验室,江苏南京210009

环境与职业医学

[1]任艺艺;杜丹丹;刘桐;尹立红;浦跃朴;梁戈玉-.IGF2BP3在MNNG致人胃上皮细胞恶性转化中的作用及机制)[J].环境与职业医学,2022(10):1146-1153

shIGF2BP3,shl3,MYCmRNA,GF2BP3

MNNG,胃上皮细胞,细胞恶性转化,N6,腺苷,m6A,甲基化修饰,致癌物,结合蛋白,胰岛素样生长因子,亚硝基,硝基胍,胃黏膜上皮细胞,GES,细胞模型,转染,慢病毒,技术构建,敲低,细胞株,MC30,简写,NC,实时定量聚合酶链反应,qRT,blotting,蛋白表达水平,免疫沉淀技术,RIP,qPCR,放线菌素,实验检测,Transwell,迁移和侵袭,侵袭能力,EMT,关键蛋白,cadherin,Vimentin,SMA,Snail,质粒,过表达,挽救,细胞表型,靶基因,染毒,CCK8,IgG,中富,空载,迁移能力,明显增强,细胞的增殖,上皮间质转化

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