[背景]矽肺主要病理特征是肺部纤维化.矽肺发生发展过程中多种miRNAs具有调控作用.[目的]利用成纤维细胞系,探究微小RNA-18a(miR-18a)对细胞外基质相关基因表达的影响,并对其作用机制进行验证.[方法]在成纤维细胞系NIH-3T3细胞中转染miR-18a模拟物以及神经源性基因座Notch同源蛋白2(Notch2)基因的小干扰RNA(siRNA).通过应用实时定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)技术检测Acta2、Col1a1及Notch2基因mRNA表达变化,通过蛋白质印迹技术检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)及Notch2蛋白的表达变化,利用双荧光素酶报告载体在人胚肾细胞HEK293T细胞中验证miR-18a调控Notch2基因的直接作用位点.[结果]qRT-PCR检测结果表明,在NIH-3T3细胞中,miR-18a模拟物过表达36 h抑制了Col1a1以及Acta2的mRNA表达(P<0.05),同时利用蛋白质印迹技术检测发现,miR-18a模拟物过表达48 h后α-SMA蛋白表达丰度降低.通过qRT-PCR未检测到过表达miR-18a 36 h对于Notch2基因表达的影响,通过蛋白质印迹技术检测发现过表达miR-18a模拟物36 h可以在蛋白水平上抑制Notch2的表达.双荧光素酶报告载体检测结果发现,在HEK293T细胞中,无论是过表达miR-18a模拟物或者抑制物24 h均证明了Notch2是miR-18a的直接靶基因.当Notch2被抑制36 h时,qRT-PCR检测发现Acta2和Col1a1基因表达下调(P<0.05);蛋白质印迹技术检测表明α-SMA在蛋白水平也受到抑制.[结论]本研究发现miR-18a可以通过直接作用于靶基因Notch2的3'UTR而抑制其表达,从而抑制成纤维细胞系NIH-3T3细胞外基质相关基因的表达.

矽肺;微小RNA-18a;神经源性基因座Notch同源蛋白2

郝家祺;文静;刘春城;蔡禄

内蒙古科技大学 生命科学与技术学院,内蒙古包头 014010;内蒙古科技大学 内蒙古自治区功能基因组生物信息学重点实验室,内蒙古包头 014010

环境与职业医学

[1]郝家祺;文静;刘春城;蔡禄-.微小RNA-18a靶向Notch2抑制NIH-3T3细胞外基质相关基因的表达)[J].环境与职业医学,2022(07):786-791

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