目的 筛选参与内皮细胞调控骨肉瘤转移的关键分子——富亮氨酸胶质瘤失活蛋白4(leucine-rich glioma inactivated proteins 4,LGI4),并分析LGI4参与骨肉瘤转移的功能及分子机制.方法 建立人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)-骨肉瘤细胞共培养模型,利用全转录组测序方法并结合相关文献筛选表达差异倍数显著的基因,采用实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,RT-qPCR)和 Western blot 验证候选基因 LGI4 的表达变化.转染 LGI4 过表达质粒建立LGI4过表达骨肉瘤稳定细胞系143B和MTF;实验分为阴性对照组(正常培养的骨肉瘤细胞)、共培养组(HUVECs与骨肉瘤细胞共培养)、共培养基组(HUVECs培养基与骨肉瘤细胞共培养)、载体对照组(转染过表达对照载体)和LGI4组(转染过表达LGI4载体),采用Transwell和划痕实验检测骨肉瘤细胞的迁移、侵袭能力.利用裸鼠体内转移模型验证LGI4对骨肉瘤细胞远处转移的影响;采用生物信息学分析LGI4的下游潜在靶信号通路,并利用相关抑制剂进行回复实验,明确靶信号通路在LGI4调控骨肉瘤转移中的作用.结果 人骨肉瘤细胞系143B及MTF与HUVECs共培养后LGI4表达降低(P＜0.05);与阴性对照组相比,共培养组和共培养基组的迁移侵袭能力明显增加,而LGI4组的迁移侵袭能力较载体对照组比较明显减弱(P＜0.05).裸鼠体内实验证明LGI4组的转移能力受到抑制;进一步分析发现NOTCH4信号通路是LGI4的下游靶信号通路,功能回复实验证实LGI4通过抑制NOTCH4信号通路参与骨肉瘤转移(P＜0.05).结论 内皮细胞通过抑制骨肉瘤细胞LGI4表达激活NOTCH4信号通路促进肿瘤转移.

骨肉瘤;LGI4;血管内皮;NOTCH4

马红敏;郝翔麟;吕杨帆;曹亚;徐嘉忆;董文浩;王亚丽;付万垒;郭乔楠

400037重庆,陆军军医大学(第三军医大学)第二附属医院病理科

陆军军医大学学报

[1]马红敏;郝翔麟;吕杨帆;曹亚;徐嘉忆;董文浩;王亚丽;付万垒;郭乔楠-.内皮细胞通过抑制LGI4表达激活NOTCH4信号通路促进骨肉瘤细胞转移)[J].陆军军医大学学报,2022(20):2088-2097

LGI4,NOTCH4

细胞转移,细胞调控,关键分,亮氨酸,胶质瘤,失活,leucine,rich,glioma,inactivated,proteins,立人,人脐静脉内皮细胞,human,umbilical,vein,endothelial,cells,HUVECs,细胞共培养,培养模型,全转录组测序,文献筛选,表达差异,倍数,real,quantitative,qPCR,blot,证候,候选基因,表达变化,转染,过表达质粒,稳定细胞系,143B,MTF,基组,Transwell,划痕实验,实验检测,侵袭能力,裸鼠,模型验证,远处转移,生物信息学分析,回复,人骨肉瘤细胞,迁移侵袭,体内实验,肿瘤转移,血管内皮

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