目的:基于生物信息学技术探索T细胞免疫球蛋白黏蛋白3(Tim-3)基因在克罗恩病(CD)肠组织中的表达、临床意义及可能机制.方法:从公共基因表达数据库(GEO)中下载CD的表达谱芯片GSE112366、GSE75214、GSE16879和GSE186582.GEO2R在线工具进行数据处理和分析.首先观察Tim-3在正常组织、活动期CD和缓解期CD肠组织的mRNA表达水平,利用Spearman秩相关分析观察活动期CD患者肠组织Tim-3表达水平与CD简化内镜(SES-CD)评分的关系.随后分析CD患者肠组织Tim-3的表达水平在英夫利昔单抗(IFX)或乌司奴单抗(UST)治疗前后的差异,并利用受试者工作特征(ROC)曲线评估第0周CD患者肠组织Tim-3的mRNA表达水平对生物制剂临床疗效的预测价值.Cibersort在线工具估算各数据集中CD患者肠组织M0、M1和M2型巨噬细胞比例,并进行肠组织Tim-3表达与巨噬细胞比例的相关性分析.收集温州医科大学附属第二医院育英儿童医院12例活动期CD患者和15名性别年龄匹配的健康对照者,采用免疫荧光方法测定肠组织中Tim-3、CD68的表达水平和CD68+Tim-3+巨噬细胞的数量.最后收集6例活动期CD患者和8名健康对照者,采用荧光定量PCR法测定肠组织中Tim-3和M1、M2相关细胞因子的mRNA表达水平.结果:在4个数据集中均发现,与正常肠组织相比,Tim-3的mRNA表达水平在活动期CD患者肠组织中显著增高.活动期CD患者较缓解期CD患者肠组织中Tim-3的mRNA表达水平亦显著升高.活动期CD患者肠组织Tim-3的mRNA表达水平与SES-CD评分呈正相关(r=0.39,P<0.001).IFX/UST治疗后CD患者肠组织Tim-3的mRNA表达水平较治疗前降低.此外IFX应答组与无应答组相比,肠组织Tim-3的mRNA表达水平较低.治疗第4～6周,ROC曲线分析显示第0周活动期CD患者肠组织Tim-3表达水平对IFX疗效具有预测价值(AUC=0.70,P=0.04).Cibersort分析发现肠组织Tim-3的mRNA表达水平与活动期CD患者肠组织中M0及M1型巨噬细胞浸润水平显著正相关(P<0.05).免疫荧光结果显示CD患者炎性肠黏膜中CD68和Tim-3表达均高于健康对照者(P<0.05).此外,CD68+Tim-3+双阳性巨噬细胞比例在CD患者炎性部位亦明显增多.荧光定量PCR结果显示CD患者肠组织Tim-3 mRNA表达水平较健康对照者高(P<0.05),且CD患者肠组织Tim-3 mRNA表达水平与M1型巨噬细胞相关细胞因子TNF-α和IL-1β的表达呈正相关.结论:Tim-3可能通过影响M1型巨噬细胞极化在CD发生发展中扮演重要角色,且可能预测早期IFX疗效.

T细胞免疫球蛋白黏蛋白3;巨噬细胞;克罗恩病;生物信息学

林道泼;邵晓晓;胡定元;吴昊;蒋益

温州医科大学附属第二医院育英儿童医院 消化内科,浙江 温州 325027

温州医科大学学报

[1]林道泼;邵晓晓;胡定元;吴昊;蒋益-.Tim-3调控巨噬细胞极化在克罗恩病发生发展中的作用)[J].温州医科大学学报,2022(12):947-955

GSE112366,GSE75214,GSE16879,GSE186582,CD68+Tim

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