典型文献
甘蔗线条花叶病毒RNA沉默抑制子的寄主互作蛋白鉴定
文献摘要：
甘蔗线条花叶病毒(Sugarcane streak mosaic virus,SCSMV)是引起甘蔗花叶病的一种主要病原.SCSMV编码的P1蛋白是RNA沉默抑制子,在SCSMV抑制寄主的RNA沉默防御中发挥关键作用,但其作用机制尚未清楚.与寄主蛋白互作是RNA沉默抑制子发挥其抑制作用的主要途径之一,因此鉴定与病毒RNA沉默抑制子互作的寄主蛋白是研究抑制子作用机制的一个重要方法.为探究SCSMV P1抑制寄主RNA沉默的机制,本研究首先将SCSMV P1基因连接到质粒pGBKT7上构建诱饵质粒pGBKT7-P1,然后对pGBKT7-P1进行毒性和自激活检测,最后以pGBKT7-P1为诱饵,采用酵母双杂交技术从甘蔗cDNA文库中筛选与P1互作的寄主蛋白.结果显示,成功构建pGBKT7-P1诱饵质粒.将pGBKT7-P1诱饵质粒转入Y2H Gold酵母菌株后,酵母菌株在SD/-Trp平板及液体培养基中生长良好,表明pGBKT7-P1诱饵质粒对Y2H Gold酵母菌株无毒性.含pGBKT7-P1诱饵质粒的酵母菌株在SD/-Trp/X-α-Gal平板上长出白色菌落未变蓝,在SD/-Trp/X-α-Gal/AbA和SD/-Trp/-Leu/X-α-Gal/AbA平板上无菌落生长,表明pGBKT7-P1诱饵质粒无自激活活性.用pGBKT7-P1诱饵质粒对甘蔗cDNA文库进行筛选,经SD/-Trp/-Leu/X-α-Gal/AbA平板筛选1次及SD/-Trp/-Leu/-His/-Ade/X-α-Gal/AbA平板筛选3次后,获得42个阳性酵母克隆,提取阳性酵母质粒并导入大肠杆菌中扩大培养,经测序及blastx比对分析,获得13个可能与SCSMV P1互作的寄主甘蔗蛋白,分别是生长素应答蛋白IAA1、IAA15,转录因子NAC、GATA4、OFP4,真核翻译起始因子eIF5A,分子伴侣DnaJ,辅分子伴侣SBA1,重金属相关异戊二烯化植物蛋白HIPP35,mec-8和unc-52蛋白同系物抑制子SMU2,外膜孔蛋白OEP24,及2个未表征蛋白.基于这些蛋白的功能,推测P1可能通过与寄主蛋白互作来调控寄主防御反应相关基因的表达,和/或通过与寄主蛋白互作来影响寄主RNA沉默相关蛋白的合成、加工或转运,从而发挥其RNA沉默抑制子的功能.研究结果为后续深入解析P1抑制RNA沉默的作用机制奠定了重要基础.
文献关键词：
甘蔗线条花叶病毒;RNA沉默抑制子;P1蛋白;互作蛋白
中图分类号：
[1]
农业科学（S）
/
植物保护（S4）
/
病虫害及其防治（S43）
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农作物病虫害及其防治（S435）
/
经济作物病虫害（S435.6）
/
糖料作物病虫害（S435.66）
/
甘蔗（S435.661）
作者姓名：
冯小艳;王俊刚;王文治;沈林波;赵婷婷;冯翠莲;张树珍
作者机构：
中国热带农业科学院热带生物技术研究所,海南海口 571101
文献出处：
引用格式：
[1]冯小艳;王俊刚;王文治;沈林波;赵婷婷;冯翠莲;张树珍-.甘蔗线条花叶病毒RNA沉默抑制子的寄主互作蛋白鉴定)[J].热带作物学报,2022(06):1231-1239
A类：
SCSMV,blastx,IAA15,OFP4,eIF5A,SBA1,HIPP35,SMU2,OEP24
B类：
甘蔗线条花叶病毒,寄主,互作蛋白,蛋白鉴定,Sugarcane,streak,mosaic,virus,甘蔗花叶病,主要病原,P1,蛋白互作,接到,质粒,pGBKT7,诱饵,自激活检测,酵母双杂交技术,cDNA,文库,转入,Y2H,Gold,酵母菌株,Trp,液体培养基,无毒性,Gal,未变,AbA,Leu,无菌,菌落生长,活活,平板筛选,His,Ade,母质,大肠杆菌,扩大培养,比对分析,生长素,NAC,GATA4,翻译起始因子,分子伴侣,DnaJ,金属相,异戊二烯,植物蛋白,mec,unc,同系物,外膜,防御反应
AB值：
0.235505
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