典型文献
小麦酵母双杂交文库构建及文库质量的鉴定
文献摘要：
以中国春小麦叶、茎、幼穗及花后3、6、9、12、15、20、25d的籽粒为材料,利用Gateway技术构建中国春小麦cDNA初级文库和次级文库,由次级文库质粒转化Y187酵母菌株构建出酵母双杂交文库.通过mat-ing 法筛选小麦粒质量基因 TaDAR1的互作蛋白,以此来鉴定文库的有效性.结果表明:初级文库容量为1.82×107 CFU/mL、次级文库的容量为1.91×107 CFU/mL,文库重组率均大于96％,插入片段平均长度在1 000 bp以上.酵母双杂交文库转化效率为1.97×105 CFU/μg,文库容量为2.04×107 CFU/mL.构建诱饵载体pGBKT7-TaDAR1并转化Y2H酵母菌株,经检验存在自激活现象,进一步截断检测发现此蛋白N端无自激活,C端有自激活,以BD-TaDAR1-N为诱饵载体,筛选酵母文库,获得其互作蛋白序列,并命名为Ta-DAR1IP,经回转验证TaDAR1-N与TaDAR1IP存在相互作用关系.表明本试验方案构建的酵母文库是高质量的有效的.为初学者构建酵母双杂文库及使用"mating"法筛选酵母文库提供借鉴,也为后续小麦基因功能的研究奠定基础.
文献关键词：
小麦;酵母双杂交文库;自激活检测;文库筛选
中图分类号：
作者姓名：
李立群;王冰心;吕千;杨智全
作者机构：
西北农林科技大学农学院,陕西杨凌 712100
文献出处：
引用格式：
[1]李立群;王冰心;吕千;杨智全-.小麦酵母双杂交文库构建及文库质量的鉴定)[J].西北农业学报,2022(08):948-957
A类：
TaDAR1,DAR1IP,TaDAR1IP
B类：
酵母双杂交文库,文库构建,春小麦,25d,籽粒,Gateway,技术构建,cDNA,次级,质粒,Y187,酵母菌株,麦粒,粒质量,互作蛋白,库容量,CFU,平均长度,bp,转化效率,诱饵载体,pGBKT7,Y2H,活现,BD,母文,回转,相互作用关系,试验方案,方案构建,初学者,杂文,mating,基因功能,自激活检测,文库筛选
AB值：
0.281407
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