目的 研究养阴清热方(YHF)对脂多糖(LPS)导致的小鼠Treg/Th17失衡的影响及机制.方法 磁珠分选法提取小鼠脾脏CD4+T细胞,用LPS刺激CD4+T细胞,再以1、2、4 mg·mL-1 的YHF水提液分别进行干预.MTT法检测细胞增殖情况;流式细胞术检测CD4+T细胞亚群Treg/Th17比例;ELISA法检测细胞上清中细胞因子IL-10、TGF-β、IL-6、IL-12p70的含量;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测细胞中Foxp3、RORγt及信号分子JAK/STAT的表达.结果 HPLC检测鉴定出YHF水提液中8种有效成分,分别为羟基红花黄色素A、虎杖苷、芦丁、2,3,5,4'-四羟基二苯乙烯葡萄糖苷、白藜芦醇、槲皮素、大黄素和姜黄素.YHF水提液可以剂量依赖性地抑制LPS刺激的小鼠CD4+T细胞的增殖(P<0.05),增加Treg的比例(P<0.05),降低Th17的比例(P<0.01),促进培养上清中Treg相关的抗炎因子IL-10和TGF-β的分泌,抑制Th17相关的致炎因子IL-6和IL-12p70的分泌.1、2、4 mg·mL-1 YHF均能增加Foxp3蛋白的表达(P<0.05),减少RORγt蛋白的表达(P<0.01).1、2、4 mg·mL-1 YHF均能降低JAK2、STAT3及其磷酸化蛋白的表达(P<0.05).4 mg·mL-1 YHF与JAK2特异性抑制剂AG490联用可以增加培养上清IL-10和TGF-β含量(P<0.05),降低IL-6和IL-12p70含量(P<0.05),而且可以显著降低p-JAK2、p-STAT3和RORγt蛋白表达(P<0.01,P<0.001),增加Foxp3蛋白表达(P<0.01).结论 YHF可以有效抑制LPS诱导的小鼠CD4+T细胞增殖,通过抑制JAK2和STAT3信号分子表达,增加Foxp3的表达和Treg数量,减少RORγt的表达和Th17数量,调节Treg/Th17平衡及抗炎细胞因子和促炎细胞因子的分泌.

动脉粥样硬化;养阴清热方;CD4+T细胞;调节性T细胞;辅助性T细胞17;JAK/STAT

掌琳惠;马元婧;缪蓉;王伟;翁文馨;袁冬平;龙军;孙云霞

南京中医药大学药学院,江苏 南京 210023;江苏省中医院老年科,江苏 南京 210004

南京中医药大学学报

[1]掌琳惠;马元婧;缪蓉;王伟;翁文馨;袁冬平;龙军;孙云霞-.养阴清热方通过下调JAK/STAT信号通路调节Treg/Th17平衡的实验研究)[J].南京中医药大学学报,2022(09):810-818

养阴清热方,YHF

Treg,Th17,脂多糖,LPS,磁珠,分选,脾脏,CD4+T,再以,水提液,MTT,流式细胞术,细胞亚群,上清,TGF,12p70,蛋白免疫印迹法,blot,Foxp3,ROR,信号分子,HPLC,检测鉴定,有效成分,羟基红花黄色素,虎杖苷,芦丁,苯乙烯,糖苷,白藜芦醇,槲皮素,大黄素,姜黄素,剂量依赖,量依赖性,细胞的增殖,养上,抗炎因子,致炎因子,JAK2,STAT3,磷酸化,AG490,抗炎细胞因子,促炎细胞因子,动脉粥样硬化,调节性,辅助性

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