目的 观察金丝桃苷对帕金森病模型小鼠小胶质细胞和脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的小鼠小胶质细胞BV2细胞系(后简称BV2细胞)的极化的调节作用.方法 将30只雄性C57BL/6小鼠随机分为正常组、1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(1-methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tet-rahydropyridine,MPTP)组和MPTP+金丝桃苷组.采用MPTP腹腔注射制备帕金森病模型,并使用金丝桃苷(25 mg/kg)腹腔注射2周后取材检测.(1)Western blot检测各组小鼠脑酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase,TH)表达.(2)免疫荧光染色法观察各组小鼠脑黑质纹状体区离子钙接头蛋白抗原(ionized calcium bindingadapter molecule 1,Iba-1)/诱导型一氧化氮合酶(inductible nitric oxide synthase,iNOS)、Iba-1/精氨酸酶-1(Arginase-1,Arg-1)细胞数量.(3)ELISA法检测各组小鼠炎症因子肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factorα,TNF-α)和白介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)蛋白含量.(4)免疫荧光染色观察各组小鼠脑黑质纹状体区Iba-1/磷酸化蛋白激酶B(phosphorylase B kinase,p-AKT)阳性细胞比例;将BV2细胞分为正常组、LPS组和金丝桃苷组,LPS组使用1μg/mL的LPS刺激BV2细胞,金丝桃苷组使用1μg/mL的LPS刺激BV2细胞后再加入浓度为20μg/mL的金丝桃苷.(5)流式细胞术观察各组BV2细胞CD16/32和CD206阳性比率.(6)ELISA法检测各组BV2细胞上清液中TNF-α和IL-1β蛋白含量.(7)Western blot法检测各组BV2细胞p-AKT和蛋白激酶B(Protein kinase B,AKT)表达.结果(1)与正常组比较,MPTP组小鼠脑TH蛋白表达显著下降(P<0.01);与MPTP组比较,MPTP+金丝桃苷组小鼠脑TH蛋白表达显著上升(P<0.05).(2)与正常组比较,MPTP组小鼠脑黑质纹状体区Iba-1/iNOS阳性细胞显著增加(P<0.01),Iba-1/Arg-1阳性细胞显著减少(P<0.01);与MPTP组比较,MPTP+金丝桃苷组小鼠脑黑质纹状体区Iba-1/iNOS阳性细胞显著减少(P<0.01),Iba-1/Arg-1阳性细胞显著增加(P<0.05).(3)与正常组比较,MPTP组小鼠脑TNF-α和IL-1β蛋白含量显著升高(P<0.01);与MPTP组比较,MPTP+金丝桃苷组小鼠脑TNF-α和IL-1β蛋白含量显著降低(P<0.01).(4)与正常组比较,MPTP组小鼠脑黑质纹状体区Iba-1/p-AKT阳性细胞显著减少(P<0.05);与MPTP组比较,MPTP+金丝桃苷组小鼠脑黑质纹状体区Iba-1/p-AKT阳性细胞显著增加(P<0.05).(5)与正常组比较,LPS组BV2细胞CD16/32阳性比率显著升高(P<0.01),CD206阳性比率显著降低(P<0.01);与LPS组比较,金丝桃苷组BV2细胞的CD16/32阳性比率显著降低(P<0.01),CD206阳性比率显著升高(P<0.05).(6)与正常组比较,LPS组BV2细胞上清液中TNF-α和IL-1β蛋白含量显著升高(P<0.05);与LPS组比较,金丝桃苷组BV2细胞上清液中TNF-α和IL-1β蛋白含量显著降低(P<0.05).(7)与正常组比较,LPS组BV2细胞p-AKT蛋白表达显著降低(P<0.01);与LPS组比较,金丝桃苷组BV2细胞p-AKT蛋白表达显著升高(P<0.05).结论 金丝桃苷能够调节帕金森病模型小鼠小胶质细胞和LPS诱导的BV2细胞MI向M2极化,进而抑制炎症反应,其机制可能与激活AKT信号相关.

帕金森病;金丝桃苷;小胶质细胞;极化

徐幸杰;潘涛;樊慧杰;肖琪;和璐璐;李艳荣;贾璐;王利然;尉杰忠;肖保国;马存根;张波;柴智

030619 晋中,山西中医药大学多发性硬化益气活血重点研究室 山西中医药大学神经生物学研究中心;山西医科大学基础医学院;山西中医药大学第二临床学院;山西大同大学脑科学研究所;复旦大学华山医院神经病学研究所;山西省卫生健康委员会 山西中医药大学基础医学院

环球中医药

[1]徐幸杰;潘涛;樊慧杰;肖琪;和璐璐;李艳荣;贾璐;王利然;尉杰忠;肖保国;马存根;张波;柴智-.金丝桃苷对帕金森病模型小鼠小胶质细胞M1/M2极化和LPS诱导的BV2细胞极化的调节作用研究)[J].环球中医药,2022(08):1350-1358

rahydropyridine,MPTP+,bindingadapter,inductible

金丝桃苷,帕金森病模型,模型小鼠,小胶质细胞,M1,M2,LPS,BV2,细胞极化,脂多糖,lipopolysaccharide,细胞系,C57BL,苯基,吡啶,methyl,phenyl,tet,腹腔注射,取材,blot,酪氨酸羟化酶,tyrosine,hydroxylase,TH,免疫荧光染色法,脑黑质,黑质纹状体,离子钙,接头,头蛋白,ionized,calcium,molecule,Iba,诱导型一氧化氮合酶,nitric,oxide,synthase,iNOS,精氨酸酶,Arginase,细胞数量,tumor,necrosis,白介素,interleukin,蛋白含量,磷酸化,蛋白激酶,phosphorylase,kinase,AKT,阳性细胞,流式细胞术,CD16,CD206,性比率,上清液,Protein,MI,抑制炎症

0.178658