[目的]补体结合试验是布鲁氏菌病(简称"布病")血清学确诊方法.现行国家标准《动物布鲁氏菌病诊断技术》(GB/T 18646-2018)中收录的补体结合试验分为常量法补体结合试验(CFT)和微量法补体结合试验(mCFT),但两者之间的相关技术参数和结果判定标准均存在差异,导致常量法CFT和mCFT检测结果不一致.笔者通过对mCFT参数的改进优化,使现行标准中mCFT的检测结果等效于常量法CFT,实现布病CFT的高通量准确诊断,对现有布病检测方法进行了补充.[方法]参照布病常量法CFT反应条件和诊断标准,对现行国标中mCFT的反应时间、稀释液、效价测定方法、结果判定等相关参数进行改进优化.改进后的mCFT方法与原mCFT方法相比,效价测定中受检血清的稀释度由1 ∶2-1 ∶64稀释改为1∶ 10稀释,稀释方法与常量法CFT相同,确保微量法的检测临界值与常量法一致;采用酶标仪读取OD600值判定溶血强度,降低了试验人员肉眼判定的误差,提升了结果判定的效率和准确性;反应时间由37℃水浴30 min缩短为20 min,提高了检测效率又不影响检测结果;稀释液由巴比妥缓冲液改为生理盐水,与常量法使用相同稀释液并可获得理想结果.用改进的mCFT与国标的mCFT、常量法CFT分别对来自内蒙古、山东、北京、江苏等地区的409份临床牛、羊血清样品(牛血清163份、羊血清246份)进行检测,分析比较其符合率.[结果]采用改进的mCFT与常量法CFT对409份临床样品进行比对检测,改进的mCFT方法检出53份阳性、11份可疑、345份阴性;常量法CFT检出53份阳性、9份可疑、347份阴性.比较两者检测结果,只有2份牛血清样品用改进的mCFT方法检测为可疑,而常量法CFT检测为阴性,其余407份样品检测结果均一致.其中牛血清样品的符合率98.77％,羊血清样品的符合率100％,总符合率99.51％.而国标mCFT方法因阳性判定标准低于常量法CFT,且不设可疑区间,结果检出97份阳性、312份阴性.与常量法CFT结果相比较,牛血清样品的符合率88.34％,羊血清样品的符合率89.84％,总符合率为89.24％,远低于本研究改进的mCFT方法与常量法CFT 99.51％的符合率.[结论]通过对mCFT方法各参数的优化,建立了一种与常量法CFT判定标准一致,且检测结果高度符合的mCFT方法.

布鲁氏菌病;微量法补体结合试验;方法改进;应用

蒋卉;冯宇;秦玉明;朱良全;范学政;丁家波

中国农业科学院北京畜牧兽医研究所,北京100193;中国兽医药品监察所,国家/OIE布鲁氏菌病参考实验室,北京100081

中国农业科学

[1]蒋卉;冯宇;秦玉明;朱良全;范学政;丁家波-.布鲁氏菌病微量补体结合试验的方法改进和应用)[J].中国农业科学,2022(08):1676-1684

微量法补体结合试验,mCFT

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