典型文献
绵羊ovPAG7间接竞争酶联适配体检测方法的建立与应用
文献摘要：
为建立一种简便、经济、无创的应用于绵羊早期妊娠诊断的快速检测技术,以绵羊妊娠相关糖蛋白7(O-vine pregnancy-associated glycoproteins-7,ovPAG7)核酸适配体为分子识别探针,建立一种间接竞争酶联适配体(Indi-rect competitive enzyme-linked aptamer assay,ic-ELAA)检测ovPAG7的新方法,并对ovPAG7包被质量浓度、包被缓冲液、封闭条件、适配体浓度、链霉亲和素-辣根过氧化物酶(SA-HRP)稀释比例等检测条件进行优化,将建立的方法应用于人工授精后28 d的中国美利奴羊血清检测,检测结果与妊娠相关糖蛋白-酶联免疫吸附测定(PAG-ELISA)商业化试剂盒和B超检测法进行比较.结果显示,在ovPAG7包被质量浓度为2.0μg/ml、包被缓冲液为50 mmol/L碳酸盐缓冲液(pH 9.6)、1.0％牛血清蛋白质封闭2 h、适配体浓度为40 nmol/L、SA-HRP稀释比例为1:40000(体积比)、室温下竞争反应时间为40 min等优化条件下,ovPAG7在缓冲液体系和血清体系中质量浓度的线性范围均为0.1～50.0 ng/ml(R2>0.994),半数抑制质量浓度(IC50)分别为1.40 ng/ml和2.11 ng/ml,检测限分别为0.11 ng/ml和0.19 ng/ml.ovPAG7在空白样品中加标回收率为96.4％～106.8％,相对标准偏差小于6.0％.妊娠诊断结果显示,ic-ELAA法的诊断敏感性、特异性和准确率分别为96.0％、83.3％和91.2％,与B超检测结果一致性较高(Kappa值=0.810).
文献关键词：
妊娠相关糖蛋白;适配体;早期妊娠诊断;绵羊
中图分类号：
作者姓名：
卢春霞;刘长彬;万鹏程;郭延华;陈霞;李红敏;卢守亮
作者机构：
长江师范学院现代农业与生物工程学院,重庆 408100;新疆农垦科学院省部共建绵羊遗传改良与健康养殖国家重点实验室,新疆 石河子 832000;新疆农垦科学院分析测试中心,新疆 石河子 832000
文献出处：
引用格式：
[1]卢春霞;刘长彬;万鹏程;郭延华;陈霞;李红敏;卢守亮-.绵羊ovPAG7间接竞争酶联适配体检测方法的建立与应用)[J].江苏农业学报,2022(03):730-738
A类：
ovPAG7,Indi,ELAA
B类：
绵羊,间接竞争,建立与应用,无创,早期妊娠诊断,快速检测技术,妊娠相关糖蛋白,vine,pregnancy,associated,glycoproteins,核酸适配体,分子识别,识别探针,种间,rect,competitive,enzyme,linked,aptamer,assay,ic,包被,缓冲液,封闭条件,辣根过氧化物酶,HRP,稀释比例,检测条件,人工授精,国美,美利奴羊,羊血,血清检测,酶联免疫吸附测定,试剂盒,检测法,ml,碳酸盐,牛血清蛋白,血清蛋白质,nmol,体积比,竞争反应,优化条件,线性范围,半数,IC50,检测限,加标回收率,相对标准偏差,诊断结果,诊断敏感性,结果一致性,Kappa
AB值：
0.325021
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