典型文献
金黄色葡萄球菌及毒素多重实时荧光PCR检测技术及其试剂盒性能测试
文献摘要：
[目的]本文基于自筛的金黄色葡萄球菌特异性靶基因ASL1804625(sa19)以及2种重要的毒素基因(A型和U型肠毒素,sea344和seu222),建立一种同时检测金黄色葡萄球菌及其肠毒素的多重实时荧光PCR检测方法.[方法]通过优化引物浓度等因素,确定最适多重实时荧光PCR反应体系,并将此检测体系组装成试剂盒,对人工污染样品和实际样品进行检测.[结果]选用1.5×Syto9 Green作为荧光染料,优化后的反应体系为0.015 U·μL-1 Taq酶,0.10 mmol·L-1 dNTP,终浓度分别为0.05、0.10和0.20μmol·L-1的3对引物.sa19的基因组灵敏度为40.7 pg·μL-1,sea344、seu222的基因组灵敏度均为4.07 pg·μL-1;sa19的菌液浓度灵敏度为1.19×103 CFU·mL-1,sea344、seu222的菌液浓度灵敏度均为1.19×104 CFU·mL-1.构建的试剂盒组内和组间重复率均为100％.在经历60次反复冻融、72 h泡沫箱储藏、-20℃储藏90 d、4℃储藏45 d后,试剂盒检测结果仍没有显著变化,同时具有良好的特异性与抗干扰能力.[结论]本研究针对食源性金黄色葡萄球菌建立的多重实时荧光PCR法,具有快速、特异性强、灵敏度高的优点,并组建成适用于实际检测应用的商品化试剂盒,在食品安全检测方面具有广阔的应用前景.
文献关键词：
金黄色葡萄球菌;毒素基因;多重实时荧光PCR;试剂盒
中图分类号：
作者姓名：
周海波;沈宇飞;陆兆新;胡安妥;别小妹
作者机构：
南京农业大学食品科学技术学院,江苏 南京210095;南京市食品药品监督检验院,江苏 南京211198
文献出处：
引用格式：
[1]周海波;沈宇飞;陆兆新;胡安妥;别小妹-.金黄色葡萄球菌及毒素多重实时荧光PCR检测技术及其试剂盒性能测试)[J].南京农业大学学报,2022(06):1258-1265
A类：
ASL1804625,sa19,sea344,seu222,Syto9
B类：
试剂盒,靶基因,毒素基因,肠毒素,同时检测,引物,反应体系,检测体系,装成,Green,荧光染料,Taq,dNTP,pg,菌液浓度,CFU,重复率,反复冻融,泡沫箱,储藏,抗干扰能力,食源性金黄色葡萄球菌,灵敏度高,检测应用,商品化,食品安全检测
AB值：
0.218925
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