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基于报告基因的重组人促卵泡激素Fc融合蛋白生物学活性测定方法研究
文献摘要：
目的:利用转基因细胞法建立重组人促卵泡激素Fc融合蛋白(rhFSH-Fc)生物学活性检测方法.方法:利用CHO-K1-FSHR-CRE-Luc转基因细胞,按一定细胞密度种板,培养16～20 h后吸弃培养基,将rhFSH-Fc倍比稀释加入细胞板,药物作用一段时间后加入荧光素酶检测试剂,通过荧光素酶检测系统对rhFSH-Fc进行生物性活性检测,并对各试验条件参数优化及进行方法学验证.结果:rhFSH-Fc在该方法中存在量效关系且符合四参数曲线方程,R2大于0.99;方法优化后确定细胞种板密度为5×105个·mL-1,rhFSH-Fc稀释起始浓度为750 ng·mL-1,1∶5倍的稀释倍数,诱导时间为4 h,样品稀释液为DMEM/F12K+10％FBS.该方法具有良好的专属性,9次独立日间、日内精密度检测RSD均小于5％,5个不同稀释组回收率样本经6次测定,相对效价分别为(51±2.00)％、(78±2.05)％、(94±2.23)％、(124±3.46)％、(141±4.45)％;对应回收率平均值分别为(101±3.94)％、(104±3.00)％、(94±2.24)％、(99±2.68)％、(94±3.03)％,RSD均小于4％.结论:本研究利用转基因细胞成功建立rhFSH-Fc生物学活性测定方法,该方法操作简便,重复性好,准确性高,可用于rhFSH-Fc产品的常规检测.
文献关键词：
重组人促卵泡激素Fc融合蛋白;长效重组蛋白药物;报告基因法;环磷酸腺苷;CHO-K1-FSHR-CRE-Luc转基因细胞;生物学活性测定;方法学验证;信号通路
中图分类号：
作者姓名：
孙爽;王绿音;李晶;吕萍;徐可铮;梁誉龄;张慧;李湛军;梁成罡
作者机构：
沈阳药科大学,沈阳110016;中国食品药品检定研究院激素室国家卫生健康委员会生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室,北京102629
文献出处：
引用格式：
[1]孙爽;王绿音;李晶;吕萍;徐可铮;梁誉龄;张慧;李湛军;梁成罡-.基于报告基因的重组人促卵泡激素Fc融合蛋白生物学活性测定方法研究)[J].药物分析杂志,2022(01):60-67
A类：
rhFSH,F12K+10,长效重组蛋白药物
B类：
重组人促卵泡激素,Fc,融合蛋白,生物学活性测定,测定方法,转基因细胞,细胞法,活性检测,CHO,K1,FSHR,CRE,Luc,细胞密度,药物作用,荧光素酶,生物性,各试,试验条件,方法学验证,量效关系,四参数,曲线方程,方法优化,起始浓度,倍数,诱导时间,稀释液,DMEM,FBS,专属性,日间,精密度,密度检测,RSD,效价,研究利用,常规检测,报告基因法,环磷酸腺苷
AB值：
0.266372
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