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HEK-293T细胞敲除TRIM25基因促进脑心肌炎病毒复制的研究
文献摘要：
为了探究三方基序蛋白25(TRIM25)对脑心肌炎病毒(encephalomyocarditis virus,EMCV)增殖的影响,在HEK-293T细胞上使用簇状规则间隔的短回文重复序列(CRISPR/Cas9)基因编辑技术敲除TR1M25基因,并通过PCR测序和Western blot确认敲除效果,然后观察敲除细胞形态并利用试剂盒测定TRIM25缺失后细胞增殖速度的变化,确认敲除细胞与野生细胞无明显差异,用EMCV感染敲除细胞后,采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)、病毒滴定测定和Western blot等方法测定病毒基因转录水平、蛋白表达情况.结果显示:感染EMCV后,敲除细胞与野生细胞相比,显著促进了病毒的转录水平、病毒蛋白的翻译水平和子代病毒的毒力(P＜0.05).综上,在HEK-293T细胞上,成功构建TRIM25缺失细胞系,且试验表明TRIM25的缺失有助于EMCV的复制.研究结果为后续TRIM25抗病毒机制研究提供了理论依据.
文献关键词：
TRIM25基因;基因敲除;HEK-293T细胞;脑心肌炎病毒
中图分类号：
作者姓名：
刘文文;吕林;朱慧欣;延君芳;姜平;白娟
作者机构：
南京农业大学动物医学院/农业农村部动物细菌学重点实验室,江苏南京 210095
文献出处：
引用格式：
[1]刘文文;吕林;朱慧欣;延君芳;姜平;白娟-.HEK-293T细胞敲除TRIM25基因促进脑心肌炎病毒复制的研究)[J].畜牧与兽医,2022(06):78-84
A类：
TR1M25
B类：
HEK,293T,TRIM25,脑心肌炎病毒,病毒复制,基序,encephalomyocarditis,virus,EMCV,簇状规则间隔的短回文重复,重复序列,CRISPR,Cas9,基因编辑技术,blot,后观,细胞形态,试剂盒,qPCR,病毒滴定,病毒基因,基因转录水平,病毒蛋白,翻译水平,子代病毒,毒力,细胞系,抗病毒机制,基因敲除
AB值：
0.29276
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