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波形蛋白对H9N2亚型AIV复制的影响研究
文献摘要：
为研究波形蛋白(vimentin)对H9N2亚型禽流感病毒(AIV)复制的影响,构建了真核表达载体FLAG-vimentin,并采用Western blot技术验证FLAG-vimentin重组载体和病毒NP蛋白的表达情况,用荧光定量PCR技术检测病毒HA基因水平.同时,设计合成siRNA,敲低内源性vimentin,检测其对病毒HA基因表达水平的影响.构建原核表达载pCold I-vimentin,蛋白纯化后孵育细胞,采用Western blot、荧光定量PCR技术检测病毒的蛋白表达和基因水平的变化.结果证实,H9N2亚型AIV感染FLAG-vimentin重组载体转染的Hela细胞12h时,病毒NP蛋白表达减少;而在感染24和36h时,病毒NP蛋白表达上升.荧光定量PCR结果亦显示,在AIV感染后12h时,HA基因表达水平明显降低.siRNA敲低Hela细胞内源性vimentin后,H9N2亚型AIV的HA基因表达水平在病毒感染12 h时明显升高,24h时差异较小,36h时有所升高.纯化后的vimentin重组蛋白孵育细胞,在病毒感染36 h时,H9N2亚型AIV的NP蛋白表达显著被抑制.荧光定量PCR结果亦证实病毒HA基因在AIV感染后36 h时表达水平明显降低.上述结果表明,H9N2亚型AIV在人源Hela细胞上的早期复制中,vimentin能起到一定程度上的抑制作用,且其重组表达蛋白孵育细胞能够阻断H9N2亚型AIV对细胞的感染,为深入研究vimentin抗病毒复制的机制提供了重要的试验依据,同时为开展抗H9N2亚型AIV的药物研发提供了参考.
文献关键词：
波形蛋白;H9N2亚型AIV;重组蛋白表达;病毒基因表达;小干扰RNA
中图分类号：
作者姓名：
卢安然;殷贵虎;黄翔宇;黄静雯;胡嘉宁;蔡怡秦;冯秀丽
作者机构：
南京农业大学动物医学院/农业农村部动物细菌学重点实验室/教育部动物健康与食品安全国际合作联合实验室,江苏南京 210095
文献出处：
引用格式：
[1]卢安然;殷贵虎;黄翔宇;黄静雯;胡嘉宁;蔡怡秦;冯秀丽-.波形蛋白对H9N2亚型AIV复制的影响研究)[J].畜牧与兽医,2022(04):93-101
A类：
B类：
波形蛋白,H9N2,AIV,vimentin,禽流感病毒,真核表达载体,FLAG,blot,技术验证,重组载体,NP,HA,基因水平,设计合成,siRNA,敲低,内源性,基因表达水平,原核表达,pCold,蛋白纯化,孵育,转染,Hela,12h,36h,时明,24h,时差,重组表达,抗病毒,病毒复制,试验依据,药物研发,重组蛋白表达,病毒基因表达,小干扰
AB值：
0.24209
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