番鸭白肝病是2014年以来我国番鸭流行的一种新疫病,其病原为一种与鸭腺病毒B型法国GR株同源性较高的新型腺病毒,暂命名为鸭腺病毒B血清2型(DAdV-B2),将法国GR株命名为鸭腺病毒B血清1型(DAdV-B1).为建立同时检测DAdV-B1和DAdV-B2的方法,本研 究根据GenBank中DAdV-B1 fiber基因和DAdV-B2fiber1基因序列特征,分别设计了 2对特异性引物,通过优化反应条件,建立了可以同时检测这两种病毒的双重PCR方法.结果显示:优化后的PCR方法最佳退火温度为60.1℃,最适引物浓度为0.16 μmol/L;利用该方法对DAdV-B1、DAdV-B2、鸭腺病毒A型(DAdV-A)、禽腺病毒血清4型(FAdV-4)、番鸭呼肠孤病毒(MDRV)、新型呼肠孤病毒(NDRV)、番鸭源鹅细小病毒(MDGPV)、番鸭细小病毒(MDPV)和禽坦布苏病毒(ATUMV)等检测,结果显示,该方法仅对DAdV-B1和DAdV-B2有特异性扩增,对其他鸭临床常见病原均无扩增,特异性较强.将DAdV-B1 fiber和DAdV-B2 fiber1质粒标准品等体积混合并作10倍倍比稀释后作为模板,利用该双重PCR方法检测,结果显示,该方法对DAdV-B1fiber和DAdV-B2fiber1质粒标准品的最低检测限分别为175拷贝/μL和163拷贝/μ.L,对DAdV-B2的最低检出滴度为1×101TCID50,敏感性较高.批内和批间的重复性试验检测结果均一致,重复性好.利用该双重PCR与单一PCR方法同时对64份临床样品检测,结果显示二者的符合率为100％,其中DAdV-B2的阳性率为79.7％(51/64),DAdV-B1的阳性率为4.7％(3/64).以上结果表明本研究建立的双重PCR方法特异性较强、敏感性较高和稳定性较好,为DAdV-B1和DAdV-B2的临床鉴别检测及其分子流行病学调查提供了技术手段.

鸭腺病毒B血清1型;鸭腺病毒B血清2型;fiber基因;fiber1基因;双重PCR

江丹丹;林昶;黄志坚;肖世峰;王劭;林锋强;程晓霞;朱小丽;陈秀琴;董慧;陈少莺;陈仕龙

福建省农业科学院畜牧兽医研究所,福建 福州 350013;福建农林大学动物科学学院(蜂学学院),福建 福州 350002;三明市绿色食品发展中心,福建 三明 365000;福建省畜禽疫病防治工程技术研究中心,福建 福州 350013

中国预防兽医学报

[1]江丹丹;林昶;黄志坚;肖世峰;王劭;林锋强;程晓霞;朱小丽;陈秀琴;董慧;陈少莺;陈仕龙-.鸭腺病毒B血清1型和血清2型双重PCR检测方法的建立及应用)[J].中国预防兽医学报,2022(08):855-860

DAdV,B2fiber1,MDGPV,ATUMV,fiber1,B1fiber,101TCID50

建立及应用,肝病,疫病,原为,GR,同源性,同时检测,究根,GenBank,基因序列特征,特异性引物,优化反应,反应条件,退火温度,禽腺病毒,毒血,FAdV,鸭呼肠孤病毒,MDRV,NDRV,鹅细小病毒,番鸭细小病毒,MDPV,禽坦布苏病毒,常见病,质粒,标准品,检测限,拷贝,滴度,重复性试验,试验检测,均一,样品检测,符合率,法特,临床鉴别,鉴别检测,分子流行病学,流行病学调查

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