[背景]猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)、猪圆环病毒三型(porcine circovirus type Ⅲ,PCV3)和猪流感病毒(swine influenza virus,SIV)是3种影响猪只健康的重要呼吸道病原,对养猪业造成严重的经济损失,因此需要建立高效快速的检测方法,以了解3种病原在国内的流行情况.[目的]建立能同时检测PRRSV、PCV3和SIV的三重RT-PCR方法,为3种病毒的流行病学调查和疾病监控提供技术支持.[方法]针对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV),猪圆环病毒三型(PCV3),猪流感病毒(SIV)基因序列,分别设计3对特异性引物,扩增PRRSV M和N基因(436 bp)、PCV3 Cap基因(619 bp)和SIV M基因(199 bp).通过对退火温度和引物浓度优化建立三重RT-PCR检测方法,并对建立的多重检测方法进行特异性、敏感性、重复性试验验证.[结果]建立了能够同时快速检测PRRSV、PCV3、SIV的三重RT-PCR方法,而对猪瘟病毒(classical swine fever virus,CSFV)、猪伪狂犬病病毒(pseudorabies virus,PRV)、猪圆环病毒 2 型(porcine circovirus type Ⅱ,PCV2)、猪细小病毒 2 型(porcine parvovirus Ⅱ,PPV2)、猪细小病毒 3 型(porcine parvovirus Ⅲ,PPV3)和猪细环病毒 1 型(torque teno sus virus Ⅰ,TTSuV1)等6种病原的扩增均为阴性,特异性较好.敏感性结果显示,同时检测PRRSV、PCV3、SIV这3种病原的检测下限为100 copies/μL,批间与批内试验结果均一致.用该方法对黑龙江省部分地区猪场的67份临床病料进行检测,结果显示PRRSV阳性率为16.5％,PCV3阳性率为10.5％,SIV阳性率为10.5％,而且存在混合感染.[结论]该方法灵敏度高、特异性强,能够应用于临床样品检测,有效预测病原的流行情况.

猪繁殖与呼吸综合征病毒;猪圆环病毒三型;猪流感病毒;三重RT-PCR

王梦杰;张文立;王欣荣;陈见兴;夏长友;陈洪岩;张贺;王玉娥

中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室,黑龙江哈尔滨150069

微生物学通报

[1]王梦杰;张文立;王欣荣;陈见兴;夏长友;陈洪岩;张贺;王玉娥-.猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪圆环病毒三型、猪流感病毒三重RT-PCR检测方法建立及初步应用)[J].微生物学通报,2022(12):5092-5099

猪圆环病毒三型,PPV2,PPV3,teno,TTSuV1

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