目的 探讨瑞香素(daphnetin,DAP)对人类风湿关节炎滑膜成纤维细胞(RA-FLS)的作用及其与内质网应激(en-doplasmic reticulum stress,ERS)PERK/ATF4/CHOP信号通路的关系.方法 RA-FLS细胞培养,免疫荧光法检查波形蛋白(vimentin)和CD68对细胞进行鉴定;CCK-8检测(0、5、10、20、30、40、50、60、70)mg·L-1 DAP对RA-FLS细胞增殖活性的影响,根据增殖活性将实验分为空白组(Blank)、低剂量组(L-DAP)、中剂量组(M-DAP)、高剂量组(H-DAP)以及高剂量+抑制剂4-PBA组(H-DAP+4-PBA);ELISA检测TNF-α、IL-6水平;流式细胞术检测细胞凋亡;Transwell及划痕实验检测细胞侵袭及迁移能力,Western blot检测细胞中与内质网应激相关蛋白GRP78、PERK、p-PERK、ATF4、CHOP、Caspase-12、C-caspase-12、Bcl-2表达.结果 CCK-8结果显示,与0 mg·L-1 DAP组比较,20～70 mg·L-1 DAP中各组增殖活性均差异具有显著性(P<0.05),组间比较后0、20、40、60 mg·L-1 DAP对应的细胞增殖率差异具有统计学意义(P<0.05),以此浓度分别作为空白、低剂量、中剂量、高剂量组以及高剂量+4-PBA实验分组依据;DAP可成浓度依耐性抑制RA-FLS细胞炎症因子IL-6、TNF-α释放,减弱细胞侵袭能力,促进细胞凋亡,上调PERK、p-PERK、ATF4、GRP78、CHOP及Caspase-12及C-caspase-12蛋白表达,降低抗凋亡蛋白Bcl-2表达水平.另一组实验证明,高剂量DAP+4-PBA可上调IL-6、TNF-α表达以及细胞侵袭,抑制细胞凋亡及ERS相关蛋白表达.结论 DAP可通过激活PERK/ATF4/CHOP信号通路调节相关炎症因子分泌,抑制RA-FLS细胞增殖及侵袭,诱导细胞凋亡,有望成为治疗RA的潜在途径.

瑞香素;类风湿关节炎;PERK/ATF4/CHOP信号通路;内质网应激;滑膜成纤维细胞;凋亡

敖琴;胡欢;刘俊;曾家顺;黄颖;凌益;李培霆;秦龙燕;李龙

贵州医科大学临床医学院,贵州 贵阳 550004;贵州医科大学附属医院风湿免疫科,贵州 贵阳 550004;贵州中医药大学附属第二医院,贵州 贵阳 550003

中国药理学通报

[1]敖琴;胡欢;刘俊;曾家顺;黄颖;凌益;李培霆;秦龙燕;李龙-.基于PERK/ATF4/CHOP信号通路探讨瑞香素对类风湿关节炎滑膜成纤维细胞的影响)[J].中国药理学通报,2022(05):705-711

daphnetin,doplasmic,DAP+4

PERK,ATF4,CHOP,瑞香素,类风湿关节炎滑膜成纤维细胞,RA,FLS,内质网应激,reticulum,stress,ERS,细胞培养,免疫荧光法,波形蛋白,vimentin,CD68,CCK,细胞增殖活性,Blank,高剂量,PBA,流式细胞术,Transwell,划痕实验,实验检测,迁移能力,blot,GRP78,Caspase,caspase,Bcl,均差,较后,细胞增殖率,耐性,细胞炎症因子,细胞侵袭能力,抗凋亡,凋亡蛋白,另一组,可上

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