目的 颗粒酶B(GZMB)在类风湿关节炎中发挥作用的机制尚不完全清楚.文章主要研究GZMB对类风湿关节炎成纤维细胞样滑膜细胞(RA-FLSs)的增殖和炎症的影响及其潜在的机制.方法 采用RT-qPCR和Western blot检测RA-FLSs细胞中GZMB的表达,构建GZMB以及丝甘蛋白聚糖(serglycin;SRGN)过表达载体(oe-GZMB;oe-SRGN)和GZMB干扰质粒(si-GZMB)并转染到RA-FLSs中,RT-qPCR和Western blot检测过表达和干扰效率.CCK-8实验以及EdU检测细胞增殖水平.使用ELISA试剂盒检测炎性因子IL-6、IL-8和IL-1β的表达水平.免疫共沉淀(CO-IP)实验检测GZMB和SRGN之间的相互作用.Western blot检测NF-kappaB信号通路相关蛋白表达水平.结果 与正常人的滑膜细胞(NC-FLSs)相比,GZMB在RA-FLSs细胞中表达上调(P<0.01);过表达GZMB能促进RA-FLSs的增殖和炎症反应(P<0.01),而敲除GZMB则显著抑制RA-FLSs的增殖和炎症反应(P<0.05);RT-qPCR和Western blot检测显示,与NC-FLSs相比,SRGN在RA-FLSs细胞中高表达(P<0.01).CO-IP实验验证GZMB能够与SRGN结合(P<0.01),且过表达SRGN逆转了GZMB敲除对RA-FLSs的增殖和炎症反应的抑制作用(P<0.01).此外,过表达SRGN也逆转了GZMB敲除对NF-kappaB信号通路相关蛋白(GZMB、SRGN、P65、p-P65和P50)的抑制作用(P<0.01).结论 过表达GZMB能促进RA-FLSs的增殖和炎症反应,此外,GZMB能和SRGN互相作用并通过NF-kappaB信号通路调节RA-FLSs的增殖和炎症反应.

类风湿关节炎;颗粒酶B;丝甘蛋白聚糖;细胞增殖;炎症反应

詹宇威;林书典;詹锋;黄艳艳;杨舟

570311海口,海南省人民医院(海南医学院附属海南医院)风湿免疫科

医学研究与战创伤救治

[1]詹宇威;林书典;詹锋;黄艳艳;杨舟-.颗粒酶B通过SRGN/NF-kappaB信号通路调节类风湿关节炎成纤维细胞样滑膜细胞的增殖和炎症反应)[J].医学研究与战创伤救治,2022(12):1244-1251

SRGN,丝甘蛋白聚糖,serglycin

颗粒酶,kappaB,类风湿关节炎,成纤维细胞,滑膜细胞,细胞的增殖,GZMB,RA,FLSs,qPCR,blot,过表达载体,oe,质粒,si,转染,CCK,EdU,试剂盒,炎性因子,免疫共沉淀,实验检测,蛋白表达水平,正常人,NC,敲除,P65,P50

0.127444