目的 研究程氏蠲痹汤(JBT)通过PI3K/Akt/mTOR信号轴调控类风湿关节炎滑膜成纤维细胞(RA-FLS)自噬的影响及相关机制.方法 实验分为4组:FLS组、FLS+JBT组、FLS+RAPA组、FLS+RAPA+JBT组.CCK8检测程氏蠲痹汤抑制RA-FLS的最佳浓度和时间,透射电镜观察细胞自噬小体的变化,自噬双标腺病毒实验观察细胞内自噬体、自噬溶酶体数量,RT-qPCR和Western blot检测相关指标表达水平.结果 CCK8实验筛选结果表明JBT冻干粉浓度在0.5 mg/mL,培养12 h效果最佳.电镜结果与自噬双标腺病毒实验结果趋势相同,FLS组中自噬体少量存在,JBT加入能显著增加自噬体,自噬溶酶体较少.RT-qPCR结果显示,FLS+RAPA+JBT组较FLS组、FLS+JBT组、FLS+RAPA组相比,PI3K、Akt和mTOR的mRNA水平降低更明显(P<0.01).WB分析显示,FLS+RAPA+JBT组较FLS组、FLS+JBT组、FLS+RAPA组相比,PI3K、Akt、mTOR蛋白的水平无明显差异(P>0.05),p-PI3K、p-Akt、p-mTOR、P62受到了明显抑制(P<0.05).FLS+RAPA+JBT组较FLS组、FLS+JBT组、FLS+RAPA组相比,Beclin-1、LC3B蛋白表达量明显上升(P<0.05).结论 程氏蠲痹汤可抑制RA-FLS的存活率,并可提高细胞自噬水平,其机制可能与下调PI3K/Akt/mTOR信号通路有关.

程氏蠲痹汤;滑膜成纤维细胞;细胞自噬;PI3K/Akt/mTOR

孙广瀚;许霞;万磊;南淑玲;王玉凤;赵黎;程卉;王坤;刘莹;方妍妍;孙朗;朱俊

安徽中医药大学中医学院,安徽 合肥 230012;安徽中医药大学第一附属医院,安徽 合肥230031;安徽中医药大学科研技术中心,安徽 合肥 230012

南方医科大学学报

[1]孙广瀚;许霞;万磊;南淑玲;王玉凤;赵黎;程卉;王坤;刘莹;方妍妍;孙朗;朱俊-.程氏蠲痹汤通过抑制PI3K/Akt/mTOR信号轴促进类风湿关节炎滑膜成纤维细胞的自噬)[J].南方医科大学学报,2022(11):1726-1731

程氏蠲痹汤,FLS+JBT,FLS+RAPA,FLS+RAPA+JBT

PI3K,Akt,mTOR,类风湿关节炎滑膜成纤维细胞,相关机制,CCK8,测程,最佳浓度,透射电镜,电镜观察,细胞自噬,自噬小体,腺病毒,实验观察,自噬体,自噬溶酶体,qPCR,blot,冻干粉,平降,WB,P62,Beclin,LC3B,可抑制

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