目的 建立一种双标记时间分辨荧光免疫法(TRFIA)用于定量检测血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和超敏C-反应蛋白(hs-CRP)水平.方法 将抗TNF-α和hs-CRP单克隆抗体包被在96孔板,制备铕(Eu3+)和钐(Sm3+)检测抗体偶联物,建立双抗体夹心TRFIA法并组装成试剂盒,评价此试剂盒的灵敏度、线性范围、加标回收率和各项检测性能.结果 建立了TRFIA检测血清TNF-α和hs-CRP水平的新方法 并组装成试剂盒,此试剂盒对TNF-α检测的线性范围为0～100 ng/L,灵敏度为0.05 ng/L,对hs-CRP检测的线性范围为0～100 mg/L,灵敏度为0.02 mg/L;对TNF-α检测的加标回收率92.00％～107.00％,对hs-CRP检测的加标回收率95.00％～106.82％,与其他常见的血清干扰物质无明显的交叉反应;对TNF-α检测的批内CV 4.57％～9.24％,批间CV 5.13％～9.27％;对hs-CRP检测的批内CV 3.57％～7.69％,批间CV 6.07％～10.00％;试剂盒能够在4℃稳定保存6个月,37℃下可稳定保存7 d以上.TNF-α的检测阈值为0.44 ng/L,hs-CRP的检测阈值为1.41 mg/L.该试剂盒检测判定结果 与临床情况相一致,符合率100％.结论 双标记TRFIA法可定量检测TNF-α和hs-CRP水平,具有灵敏度和准确度高、特异性强、方便快捷等优点,可为脓毒症临床样品的早期筛查、疗效评价和预后评估提供一种新的检测方法 .

脓毒症;肿瘤坏死因子-α;超敏C-反应蛋白;双标记时间分辨荧光免疫法

李云鹏;郝培远;曹雪明;闫兆月;王恩锋;黄书满;代荣钦

河南省人民医院外科重症监护病房 450003;华中阜外医院心内科

天津医药

[1]李云鹏;郝培远;曹雪明;闫兆月;王恩锋;黄书满;代荣钦-.TNF-α/hs-CRP双标记时间分辨荧光免疫法用于脓毒症早期筛查诊断的研究)[J].天津医药,2022(08):868-872

双标记时间分辨荧光免疫法

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