典型文献
PIN1基因敲除的长白猪胎儿成纤维细胞系的建立
文献摘要：
目的 利用成簇的规律间隔短回文重复序列和相关蛋白9(clustered regular interval short palindromic repeats/CRISPR-associated protein 9,CRISPR/Cas9)基因编辑技术敲除长白猪胎儿成纤维细胞(porcine fetal fibroblasts,PFFs)的PIN1基因,以构建PIN1基因敲除长白猪胎儿成纤维细胞系.方法 对人和猪的PIN1基因进行同源性分析.利用在线工具设计2个靶向猪PIN1基因第二个外显子区的sgRNAs,并克隆至pX330骨架质粒中.将构建成功的打靶质粒和Neomycin抗性质粒共转染至PFFs中,用G418药物筛选出抗性单细胞克隆,测序鉴定其基因型并从转录和翻译水平鉴定PIN1的表达.结果 同源性分析显示人和猪PIN1蛋白的氨基酸序列一致性和相似性均为98％,二者三维结构的均方根偏差(RMSD)值为0.014.获得15个PIN1基因敲除的纯合单克隆细胞系,并且证实PIN1蛋白在翻译水平被完全敲除.结论 利用双sgRNAs引导的CRSIPR/Cas9系统在PFFs中高效实现PIN1基因的双等位基因敲除,成功建立PIN1基因敲除的长白猪胎儿成纤维细胞系.
文献关键词：
CRISPR/Cas9;PIN1基因;猪胎儿成纤维细胞;猪疾病模型
中图分类号：
作者姓名：
王万义;袁益琳;李琳;王盈;戴一凡;杨海元
作者机构：
211166南京,南京医科大学基础医学院,江苏省异种移植重点实验室
文献出处：
引用格式：
[1]王万义;袁益琳;李琳;王盈;戴一凡;杨海元-.PIN1基因敲除的长白猪胎儿成纤维细胞系的建立)[J].陆军军医大学学报,2022(13):1349-1355
A类：
CRSIPR,猪疾病模型
B类：
PIN1,基因敲除,长白猪,猪胎儿成纤维细胞,回文,重复序列,clustered,regular,interval,short,palindromic,repeats,CRISPR,associated,protein,Cas9,基因编辑技术,porcine,fetal,fibroblasts,PFFs,行同,同源性分析,工具设计,外显子,子区,sgRNAs,pX330,质粒,打靶,Neomycin,共转染,G418,药物筛选,单细胞,细胞克隆,基因型,翻译水平,示人,氨基酸序列,序列一致性,三维结构,均方根偏差,RMSD,单克隆细胞系,双等,等位基因
AB值：
0.324585
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