典型文献
PC12细胞SLC6A4基因沉默稳转细胞系的建立及SLC6A4基因沉默对缺氧PC12细胞凋亡的影响
文献摘要:
目的 构建SLC6A4基因RNA干扰(RNAi)-短发夹RNA(shRNA)慢病毒表达载体,建立慢病毒介导沉默SLC6A4基因的PC12细胞稳转细胞系,检测SLC6A4基因沉默对缺氧诱导的细胞凋亡的影响.方法 设计合成3条针对SLC6A4基因的shRNA干扰序列,构建于慢病毒载体质粒GV248中,在293T细胞中共转染进行慢病毒包装.转染大鼠肾上腺髓质嗜铬细胞瘤PC12细胞,荧光显微镜观察GFP荧光,筛选最佳shRNA干扰序列,应用嘌呤霉素筛选出稳定转染的细胞株.应用RT-PCR方法检测SLC6A4基因的表达,Western blot方法检测蛋白5-HTT的表达变化,流式细胞术检测沉默SLC6A4基因对缺氧诱导的PC12细胞凋亡的影响.结果 成功构建SLC6A4-shRNA慢病毒载体并转染PC12细胞,与正常对照组及干扰对照组比较,干扰组细胞内SLC6A4基因和蛋白表达明显降低(P<0.01),证实慢病毒载体能够有效沉默SLC6A4基因,沉默SLC6A4基因可以逆转缺氧诱导的细胞凋亡.结论 通过shRNA慢病毒载体途径可有效沉默PC12细胞SLC6A4基因,沉默SLC6A4基因可以逆转缺氧诱导的细胞凋亡.
文献关键词:
慢病毒载体;shRNA;RNA干扰;SLC6A4;细胞凋亡
中图分类号:
作者姓名:
张冬梅;高迎春;何蕾;陈克明;李文斌;王荣;马慧萍
作者机构:
中国人民解放军联勤保障部队第九四〇医院药剂科,甘肃 兰州 730050
文献出处:
引用格式:
[1]张冬梅;高迎春;何蕾;陈克明;李文斌;王荣;马慧萍-.PC12细胞SLC6A4基因沉默稳转细胞系的建立及SLC6A4基因沉默对缺氧PC12细胞凋亡的影响)[J].药学实践与服务,2022(05):389-394,463
A类:
GV248
B类:
PC12,SLC6A4,基因沉默,细胞系,RNAi,短发,发夹,shRNA,慢病毒表达载体,氧诱导,设计合成,建于,慢病毒载体,质粒,293T,共转染,慢病毒包装,肾上腺,髓质,嗜铬细胞瘤,荧光显微镜观察,GFP,嘌呤霉素,稳定转染,细胞株,blot,HTT,表达变化,流式细胞术,正常对照
AB值:
0.205792
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