[目的]从番木瓜4个不同成熟期果实的转录组中筛选并克隆得到1个转录因子CpMYB114L,构建番木瓜果实的cDNA文库,筛选与CpMYB114L互作的蛋白,探究CpMYB114L参与调控果实成熟的分子机理.[方法]以番木瓜'GZBG,品种的果实为材料,设计特异引物,克隆CpMYB114L CDS区,利用生物信息学软件分析该基因序列及其编码的蛋白序列.提取番木瓜不同成熟期果实的总RNA,利用all-direct法建立酵母双杂交cDNA文库.构建pGBKT7-CpMYB114L诱饵载体,对其自激活检测后,通过共转化从文库中筛选CpMYB114L互作蛋白.通过在NCBI网站上进行序列比对,明确互作蛋白的功能分类,最后对各类蛋白基因在番木瓜不同成熟期果实中的表达进行分析.[结果]CpMYB114L基因的CDS序列编码227个氨基酸,预测其相对分子质量为26 304.3,理论等电点为6.23,亲水性总平均值为-0.893.CpMYB114L蛋白序列与甜樱桃(PaWERL)、蒺藜苜蓿(MtMYB1)、黛豆(MpMYB113)、大豆(GmMYB1)和苹果(MdMYB308L)的同源性较近.cDNA文库总库容为1.15×107 CFU,重组率100％,插入片段长度为750～2 000 bp.诱饵载体pGBKT7-CpMYB114L不存在自激活.从酵母双杂交文库中筛选到30个初始阳性克隆,经回转验证后最终获得26个与CpMYB114L互作的蛋白,共分为4类,包括乙烯响应受体1(CpERS1)、酰基辅酶A硫酯酶13(CpAcots13)、热休克蛋白42(CpHSP42)和叶绿体转运子159(CpTOC159).在果实成熟过程中,CpERS1和CpHSP42表达量先上升后下降,CpAcots13表达量持续上升,CpTOC159表达量剧增后趋于平稳.[结论]推测CpMYB114L与CpERS1蛋白互作参与番木瓜果实成熟的调控.

番木瓜;酵母双杂交;果实成熟;CpMYB114L;互作蛋白筛选

周陈平;杨敏;郭金菊;邝瑞彬;杨护;黄炳雄;魏岳荣

广东省农业科学院果树研究所,农业农村部南亚热带果树生物学与遗传资源利用重点实验室,广东省热带亚热带果树研究重点实验室,广东广州510640;广东省农业科学院设施农业研究所,广东广州510640

西北农林科技大学学报（自然科学版）

[1]周陈平;杨敏;郭金菊;邝瑞彬;杨护;黄炳雄;魏岳荣-.番木瓜果实酵母双杂交文库的构建及CpMYB114L互作蛋白的筛选)[J].西北农林科技大学学报（自然科学版）,2022(07):127-137

CpMYB114L,GZBG,PaWERL,MtMYB1,MpMYB113,GmMYB1,MdMYB308L,CpERS1,CpAcots13,CpHSP42,CpTOC159

番木瓜,瓜果,酵母双杂交文库,不同成熟期,转录组,cDNA,果实成熟,分子机理,特异引物,CDS,利用生物,生物信息学软件,基因序列,all,direct,pGBKT7,诱饵载体,自激活检测,共转化,NCBI,站上,序列比对,功能分类,列编,相对分子质量,等电点,亲水性,甜樱桃,蒺藜苜蓿,大豆,苹果,同源性,总库,库容,CFU,段长度,bp,回转,应受,酰基,基辅,辅酶,硫酯酶,热休克蛋白,叶绿体,成熟过程,先上,持续上升,趋于平稳,蛋白互作,互作蛋白筛选

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