目的 探讨维替泊芬(Vp)在实验性哮喘气道重塑中的作用及其机制.方法(1)动物实验:将12只雌性BALB/c小鼠分为对照组、实验性哮喘组与Vp干预组,每组4只.实验性哮喘组小鼠使用屋尘螨提取液(HDM)滴鼻建立哮喘模型,Vp干预组在HDM激发前腹腔注射Vp进行干预,对照组给予等量生理盐水.收集小鼠肺组织及支气管肺泡灌洗液(BALF),采用HE染色、Masson染色、过碘酸希夫(PAS)染色观察肺组织病理变化,瑞氏-吉姆萨染色计数BALF中的炎性细胞;采用免疫组化检测肺组织中Yes相关蛋白(YAP)、磷酸化Yes相关蛋白(p-YAP)的表达情况,RT-PCR、Western blotting检测肺组织中YAP、p-YAP、骨桥蛋白(OPN)、平滑肌肌球蛋白重链(SMMHC)的表达情况.(2)细胞实验:将人气道平滑肌细胞(HASMC)分为对照组(加入等量生理盐水)、HDM组(加入50μg/ml HDM作用24 h)与HDM+Vp组(加入0.05 mg/L Vp刺激2 h后,加入50μg/ml HDM作用24 h),采用CCK-8法检测细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blotting检测YAP、OPN、SMMHC蛋白表达情况.结果(1)动物实验:实验性哮喘组肺组织炎症较对照组加重,支气管基底膜、气道平滑肌及支气管管壁明显增厚[(1.13±0.38)μm vs.(0.79±0.36)μm,(6.49±2.36)μm vs.(4.56±1.52)μm,(33.85±5.95)μm vs.(22.08±3.30)μm,P<0.05],气道周围胶原纤维沉积面积、PAS染色阳性面积明显增加(5.85％±2.35％vs.0.36％±0.12％,28.81％±5.89％vs.13.57％±2.08％,P<0.01),肺组织中YAP、OPN mRNA和蛋白表达水平明显升高(P<0.05或P<0.01),p-YAP/YAP比值、SMMHC mRNA和蛋白表达水平明显降低(P<0.05或P<0.01).与实验性哮喘组比较,Vp干预组小鼠肺组织炎症减轻,支气管基底膜、气道平滑肌及支气管管壁明显变薄[(0.93±0.27)μm、(4.99±1.75)μm、(26.59±2.76)μm,P<0.05],气道周围胶原纤维沉积面积、PAS染色阳性面积明显减少(2.14％±0.89％、17.92％±1.89％,P<0.05),肺组织YAP、OPN mRNA和蛋白表达水平明显降低(P<0.05或P<0.01),p-YAP/YAP比值、SMMHC mRNA和蛋白表达水平明显增高(P<0.05).(2)细胞实验:与对照组比较,HDM组细胞增殖能力增强(0.2874±0.0055 vs.0.2626±0.0051,P<0.01)、凋亡率降低(5.14％±0.82％vs.6.75％±0.21％,P<0.05),YAP、OPN蛋白表达升高(3.14±0.48 vs.1.51±0.61,5.87±2.42 vs.0.94±0.23,P<0.01),SMMHC蛋白表达降低(0.80±0.19 vs.2.96±0.96,P<0.01).与HDM组比较,HDM+Vp组细胞增殖能力减弱(0.2748±0.0043,P<0.05),凋亡率升高(6.29％±0.49％,P<0.05),YAP、OPN蛋白表达降低(2.02±0.53、2.93±1.09,P<0.05),SMMHC蛋白表达升高(2.11±0.85,P<0.05).结论 Vp可降低YAP的表达,减少YAP核移位,逆转HASMC表型转化,这可能是其抑制实验性哮喘气道重塑的机制.

Hippo/YAP信号通路;维替泊芬;哮喘;气道重塑

刘敏;王艺颖;简鼎;李媛媛;张光莉;罗征秀

重庆医科大学附属儿童医院呼吸科/儿童发育疾病研究教育部重点实验室/国家儿童健康与疾病临床医学研究中心/儿童发育重大疾病国家国际科技合作基地/儿科学重庆市重点实验室,重庆 400014

解放军医学杂志

[1]刘敏;王艺颖;简鼎;李媛媛;张光莉;罗征秀-.维替泊芬在实验性哮喘气道重塑中的作用及其机制)[J].解放军医学杂志,2022(08):745-755

HDM+Vp

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