目的:明确热休克转录因子1（HSF1）是否通过调控大鼠肺泡巨噬细胞（AM）中NOD样受体蛋白3（NLRP3）炎症小体活性改善脓毒症诱导的急性肺损伤（ALI）。方法:采用随机数字表法将24只SPF级SD大鼠分为对照组、脂多糖（LPS）组、过表达空载+LPS组、过表达HSF1+LPS组，每组6只。采用腹腔注射LPS 5 mg/kg制备脓毒症诱导的ALI大鼠模型；对照组给予等量生理盐水。过表达空载+LPS组和过表达HSF1+LPS组分别于制模前经气管内滴注过表达空载腺病毒或过表达HSF1腺病毒100 μL；对照组和LPS组滴注等量生理盐水。制模后6 h取颈动脉血，测定氧合指数（PaO 2/FiO 2）；取肺组织，苏木素-伊红（HE）染色后光镜下观察肺组织病理学改变，测定肺组织湿/干质量（W/D）比值，采用免疫组化法检测巨噬细胞特异性标志抗体CD68的阳性表达，采用蛋白质免疫印迹试验（Western blotting）检测HSF1和NLRP3的蛋白表达水平；收集支气管肺泡灌洗液（BALF），采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测白细胞介素（IL-1β、IL-18）的水平。另取正常大鼠BALF，分离原代AM培养并分为4组。空白对照组AM正常培养，不给予任何处理；LPS组采用1 mg/L的LPS处理AM 24 h制备LPS攻击模型；过表达空载+LPS组和过表达HSF1+LPS组分别用空载质粒或过表达HSF1质粒转染AM 48 h后，再用1 mg/L的LPS处理AM。采用细胞计数试剂盒-8（CCK-8）检测细胞活性，采用Western blotting检测AM中HSF1和NLRP3的蛋白表达水平，采用ELISA法测定AM培养液中IL-1β和IL-18含量。 结果:与对照组比较，LPS组大鼠肺组织结构损伤严重，肺泡腔及肺间质充血水肿，肺泡壁明显增厚及断裂，并伴有大量炎症细胞浸润，且肺W/D比值升高，巨噬细胞增加，PaO 2/FiO 2降低，肺组织和AM中HSF1蛋白表达降低、NLRP3蛋白表达升高，BALF和AM培养液中IL-1β、IL-18表达水平升高。与LPS组比较，过表达HSF1+LPS组大鼠肺损伤程度得到明显改善，且肺W/D比值显著降低（4.76±0.16比6.93±0.33， P<0.05），巨噬细胞减少，PaO 2/FiO 2显著上升〔mmHg（1 mmHg≈0.133 kPa）：397.62±19.46比280.12±37.42， P<0.05〕，肺组织和AM中HSF1蛋白表达显著上调（HSF1/GAPDH：肺组织为0.90±0.04比0.61±0.04，AM为1.10±0.10比0.57±0.08，均 P<0.05），NLRP3蛋白表达显著下调（NLRP3/GAPDH：肺组织为0.75±0.14比1.05±0.11，AM为0.81±0.09比1.14±0.17，均 P<0.05），BALF和AM培养液中IL-1β、IL-18含量显著降低〔IL-1β（ng/L）：BALF为7.82±0.45比14.09±0.58，AM为11.11±0.46比16.66±0.96；IL-18（ng/L）：BALF为50.44±3.30比66.31±5.67，AM为43.95±0.88比73.52±1.23，均 P<0.05〕。过表达空载+LPS组与LPS组各项检测指标比较差异均无统计学意义。 结论:HSF1可减轻LPS诱导的大鼠ALI，其机制可能与抑制AM中NLRP3炎症小体活化有关。

脓毒症;急性肺损伤;热休克转录因子1;NOD样受体蛋白3

金灿;张伟

遵义医科大学附属医院重症医学科，贵州遵义　563000

中华危重病急救医学

[1]金灿;张伟-.HSF1通过调控NLRP3炎症小体活化在脓毒症大鼠急性肺损伤中的保护作用)[J].中华危重病急救医学,2022(11):1167-1172

HSF1+LPS

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