以特异性吞噬脂滴并降解的脂噬为切入点,基于Akt/TFEB通路探讨泽泻汤(Zexie Decoction,ZXD)改善棕榈酸(pal-mitic acid,PA)诱导的高脂细胞模型及高脂饮食(high-fat diet,HFD)诱导的高脂动物模型肝细胞脂代谢的机制.体外转染GFP标记的微管轻链蛋白3(microtubule-associated protein light chain 3,LC3)质粒与脂滴共定位和小鼠肝脏LC3与脂滴包被蛋白(perilipin2,PLIN2)免疫荧光共定位,结果显示,与DMSO及NCD组相比,棕榈酸(PA)及高脂饮食(HFD)诱导肝细胞内蓄积大量脂质,LC3表达水平降低,脂滴与LC3共定位显著减少(P＜0.001),脂噬受损,泽泻汤干预促进LC3的表达,降低肝细胞脂质蓄积,并增加LC3与脂滴的共定位,提示脂噬被激活;Western blot结果同步证实了泽泻汤体内外诱导自噬相关蛋白LC3 Ⅱ/LC3 Ⅰ转化比及溶酶体相关膜蛋白2(lysosomal associated membrane protein 2,LAMP2)的增加,促进泛素结合蛋白1(sequesto-some-1,SQSTM1/p62)的降解(P＜0.05),共同说明泽泻汤调控脂噬途径.荧光素酶报告基因结果显示泽泻汤激活肝细胞中TFEB的表达(P＜0.05);泽泻汤体内外逆转PA及HFD诱导的肝细胞转录因子EB(transcription factor EB,TFEB)核定位的减少(P＜0.05),同时激活肝脏TFEB上调其靶基因Lamp2、Lc3B、Bcl2、Atg5的表达(P＜0.05);此外,泽泻汤体内外下调TFEB上游调控蛋白激酶B(protein kinase B,PKB,Akt)的磷酸化水平(P＜0.05).综上所述,泽泻汤促进脂噬,其机制可能与调节Akt/TFEB途径有关.

泽泻汤;脂噬;Akt/TFEB通路

王梦瑶;李二稳;高改;付中学;张效威;王辉;王潘;张振强;徐江雁;谢治深

河南中医药大学中医药科学院,河南郑州450046;中国中医科学院西苑医院,北京100089

中国中药杂志

[1]王梦瑶;李二稳;高改;付中学;张效威;王辉;王潘;张振强;徐江雁;谢治深-.泽泻汤调控Akt/TFEB促进肝细胞脂噬机制研究)[J].中国中药杂志,2022(22):6183-6190

Zexie,ZXD,mitic,perilipin2,sequesto,Lamp2,Lc3B

泽泻汤,Akt,TFEB,肝细胞,脂噬,吞噬,脂滴,Decoction,棕榈酸,pal,acid,PA,脂细胞,细胞模型,高脂饮食,high,fat,diet,HFD,动物模型,脂代谢,转染,GFP,微管,轻链,microtubule,associated,protein,light,chain,LC3,质粒,共定位,小鼠肝脏,包被,PLIN2,免疫荧光,DMSO,NCD,平降,脂质蓄积,blot,体内外,自噬相关蛋白,溶酶体,膜蛋白,lysosomal,membrane,LAMP2,泛素,结合蛋白,some,SQSTM1,p62,荧光素酶报告基因,transcription,核定,靶基因,Bcl2,Atg5,调控蛋白,蛋白激酶,kinase,PKB,磷酸化,综上所述

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