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石榴PgUGT基因表达特性与重组表达分析
文献摘要：
由糖基转移酶参与的糖基化反应是植物次生代谢产物合成中最广泛的一种修饰方式,也是次生代谢产物结构多样性的机制之一.该研究基于石榴(Punica granatum L.)转录组数据,以石榴果皮为材料,采用RT-PCR克隆得到石榴UDP-糖基转移酶(UDP-glycosyltransferase,UGT)基因(PgUGT);采用生物信息学技术对编码蛋白的基本特性进行分析,并构建系统发育树;采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)分析该基因在果实发育期内的表达模式;结合果实发育期内的总类黄酮和总花色苷含量,分析了基因表达与总类黄酮和总花色苷合成的关系;构建PgUGT的原核表达载体,对其进行原核重组表达.结果表明:(1)成功克隆得到石榴PgUGT基因(GenBank登录号为MW414607);PgUGT基因具有一个1 557 bp的开放阅读框(ORF),编码518个氨基酸,预测蛋白分子质量为55.9 kD,等电点为6.55,为不稳定的亲水蛋白;PgUGT具有糖基转移酶家族保守的PSPG基序,属于GT-B糖基转移酶基因家族.进化树分析表明,该编码蛋白属于拟南芥UGT的F类群,与葡萄和草莓的UGT亲缘关系较近.(2)qRT-PCR结果表明,石榴PgUGT基因的表达量在果实发育期内呈先升后降的模式,与总类黄酮含量的逐渐下降和总花色苷含量的逐渐上升趋势并不完全一致.(3)成功构建原核表达载体pCZN1-PgUGT;重组原核表达结果显示,重组质粒在大肠杆菌中为可溶性表达,表达的蛋白分子量约为58 kD.该研究结果为PgUGT基因在石榴类黄酮糖基化反应中的作用及功能奠定了基础.
文献关键词：
石榴;UDP-糖基转移酶;qRT-PCR;类黄酮;重组表达
中图分类号：
作者姓名：
招雪晴;杨静;沈雨;苑兆和
作者机构：
南方现代林业协同创新中心,南京210037;南京林业大学林学院,南京210037;日照市自然资源和规划局,山东日照276800
文献出处：
引用格式：
[1]招雪晴;杨静;沈雨;苑兆和-.石榴PgUGT基因表达特性与重组表达分析)[J].西北植物学报,2022(03):390-397
A类：
PgUGT,MW414607,pCZN1
B类：
石榴,基因表达特性,重组表达,表达分析,糖基转移酶,糖基化反应,次生代谢产物,产物合成,结构多样性,Punica,granatum,转录组数据,果皮,UDP,glycosyltransferase,生物信息学技术,编码蛋白,基本特性,建系,系统发育树,qRT,果实发育期,表达模式,类黄酮,花色苷,原核表达载体,GenBank,登录号,bp,开放阅读框,ORF,分子质量,kD,等电点,亲水,PSPG,基序,酶基因,基因家族,进化树分析,拟南芥,类群,草莓,亲缘关系,黄酮含量,完全一致,重组质粒,大肠杆菌,可溶性表达,分子量
AB值：
0.266617
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