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scFv-DEC205-Trap重组包涵体靶向抗原复性及过程的优化
文献摘要：
目的:疫苗防治将成为金黄色葡萄球菌防控的主要方式,如何解决靶向亚单位疫苗生产中包涵体靶向抗原的复性问题,将是蛋白亚单位疫苗生产的核心问题.方法:构建靶向树突状细胞DEC205受体的金黄色葡萄球菌重组scFv-DEC205-Trap质粒进行PCR、测序鉴定,IPTG诱导表达.对表达后形成的包涵体各项溶解条件:溶液、溶解温度、溶解时间以及是否振荡进行单因素优化;对复性缓冲液的不同添加剂和稀释浓度进行条件优化,最大限度提高包涵体蛋白复性率,Western blot检测复性蛋白抗原性.结果:离心力大于400 g,离心3 min以上,96％的包涵体蛋白沉降;含8 mol/L的尿素溶液在4～40℃溶解0.5 h以上可使包涵体蛋白充分溶解;3 mol/L精氨酸的100 mmol/L Tris-HCl缓冲液稀释5倍复性率最高,抗原性好.结论:实验证明通过适宜的溶解条件和复性条件可以从表达包涵体中获得良好抗原性的重组靶向抗原.
文献关键词：
金黄色葡萄球菌TRAP;scFv-DEC205-Trap重组抗原;变性;复性
中图分类号：
作者姓名：
佟春玉;张喆林;王森;郑小会;韩玉芳;崔玉东;宋博翠
作者机构：
黑龙江八一农垦大学生命科学技术学院,大庆163000
文献出处：
引用格式：
[1]佟春玉;张喆林;王森;郑小会;韩玉芳;崔玉东;宋博翠-.scFv-DEC205-Trap重组包涵体靶向抗原复性及过程的优化)[J].中国免疫学杂志,2022(15):1866-1871
A类：
DEC205
B类：
scFv,Trap,包涵体,金黄色葡萄球菌,主要方式,何解,疫苗生产,蛋白亚单位疫苗,树突状细胞,质粒,IPTG,诱导表达,溶解条件,溶解温度,溶解时间,单因素优化,缓冲液,稀释浓度,条件优化,blot,抗原性,离心力,尿素溶液,精氨酸,Tris,HCl,明通,TRAP,重组抗原
AB值：
0.27392
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