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基于多重PCR技术检测蜡样芽胞杆菌3种毒素基因方法的建立及评价
文献摘要：
目的:基于多重PCR技术,建立一种快速检测蜡样芽胞杆菌nhe、cytK和entFM 3种毒素基因的方法,并评价其效能.方法:煮沸法提取蜡样芽胞杆菌DNA,以蜡样芽胞杆菌nhe、cytK和entFM特异性毒素基因作为靶基因,采用NCBI primer-BLAST 5.0软件设计特异性引物,优化反应体系.建立三重PCR检测体系,并检测其特异性、灵敏度和稳定性.结果:煮沸法提取蜡样芽胞杆菌DNA,浓度为227 mg·L-1,纯度为1.50～1.60.采用多重PCR体系同时检测蜡样芽胞杆菌3种毒素致病基因,于退火温度56℃时,蜡样芽胞杆菌基因引物nhe499的扩增片段为499 bp,基因引物cytK191的扩增片段为191 bp,基因引物entFM363的扩增片段为363 bp.PCR体系扩增蜡样芽胞杆菌3种毒素基因后条带清晰明亮,且无非特异性条带,与金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌和铜绿假单胞菌均无扩增,表明蜡样芽胞杆菌基因引物nhe499、cytK191和entFM363特异性强;3种引物在同一反应体系中互不干扰.灵敏度检测,多重PCR体系最低检测限可同时达到10-1 mg·L-1;稳定性检测,多重PCR体系自制备起每6个月检测稳定性一致.结论:建立的多重PCR检测体系对于蜡样芽胞杆菌nhe499、cytK191和entFM3633种毒素基因灵敏度高、特异性强,检测结果准确稳定,检测体系具有良好稳定性,适用于快速检出蜡样芽胞杆菌的3种不同致病毒素基因.
文献关键词：
蜡样芽胞杆菌;毒素基因;多重聚合酶链式反应;灵敏度;煮沸法
中图分类号：
作者姓名：
姜菲菲;李昊宇;贾慧建;王丹;赵潇颖;王岳峰;周童;孙丽媛
作者机构：
北华大学医学技术学院分子生物教研室,吉林 吉林132013;中国铁路沈阳局集团有限公司吉林疾病预防控制所,吉林 吉林132001
文献出处：
引用格式：
[1]姜菲菲;李昊宇;贾慧建;王丹;赵潇颖;王岳峰;周童;孙丽媛-.基于多重PCR技术检测蜡样芽胞杆菌3种毒素基因方法的建立及评价)[J].吉林大学学报（医学版）,2022(05):1223-1228
A类：
nhe,cytK,entFM,nhe499,cytK191,entFM363,entFM3633
B类：
蜡样芽胞杆菌,毒素基因,快速检测,煮沸法,靶基因,NCBI,primer,BLAST,软件设计,特异性引物,优化反应,反应体系,立三,检测体系,同时检测,致病基因,退火温度,bp,条带,明亮,无非,非特异性,金黄色葡萄球菌,大肠埃希菌,铜绿假单胞菌,互不,检测限,稳定性检测,灵敏度高,多重聚合酶链式反应
AB值：
0.154616
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