典型文献
基于RPA-CRISPR-Cas12a和聚噻吩显色技术快速检测转基因植物外源基因CP4-EPSPS
文献摘要：
目的 开发基于重组酶恒温扩增(recombinase polymerase amplification,RPA)结合簇状规则间隔短链重复序列及相关蛋白(clustered regularly interspaced short palindromic repeats-associated 12a protein,CRISPR-Cas12a)和聚噻吩显色技术快速检测转基因植物外源基因CP4-EPSPS的方法.方法 利用Cas12a附属切割机制进行精准识别RPA产物中的靶标,结合阳离子水溶性共轭聚噻吩(cationic water-soluble conjugated polythiophene,PMNT)与体系中单链DNA(single stranded DNA,ssDNA)的颜色变化检测转基因产品中耐除草剂草甘膦CP4-EPSPS抗性基因.结果 167 bp的RPA引物进行扩增时,扩增体系为20μL时条带最清晰;ssDNA的碱基数为15,Cas12a酶的浓度为0.28 U为最优组合.进行RPA-CRISPR-Cas12a反应后,加入PMNT溶液,裸眼观察是溶液从红色变为黄色,紫外下照射下则颜色为橘红色变为橙黄色,检出限为45拷贝.结论 构建了一种基于PMNT颜色变化进行转基因产品的CRISPR-Cas12a的检测方法,30 min内完成整个检测过程,仅需要恒温加热可实现快速灵敏、可视化的检测.
文献关键词：
重组酶恒温扩增;簇状规则间隔短链重复序列;阳离子水溶性共轭聚噻吩;现场速测;转基因产品
中图分类号：
作者姓名：
刘华;曾海娟;唐雪明;徐丹红;雒嘉伟;王金斌
作者机构：
上海农业科学院生物技术研究所, 上海 201106;上海市农业遗传育种重点实验室, 上海 201106;上海交通大学农业与生物学院, 上海 200240;上海海洋大学食品学院, 上海 201306;兰州理工大学生命科学与工程学院, 兰州 730050
文献出处：
引用格式：
[1]刘华;曾海娟;唐雪明;徐丹红;雒嘉伟;王金斌-.基于RPA-CRISPR-Cas12a和聚噻吩显色技术快速检测转基因植物外源基因CP4-EPSPS)[J].食品安全质量检测学报,2022(23):7758-7764
A类：
重组酶恒温扩增,簇状规则间隔短链重复序列,阳离子水溶性共轭聚噻吩,PMNT,现场速测
B类：
RPA,CRISPR,Cas12a,显色,快速检测,转基因植物,物外,外源基因,CP4,EPSPS,recombinase,polymerase,amplification,clustered,regularly,interspaced,short,palindromic,repeats,associated,protein,切割机,精准识别,靶标,合阳,cationic,water,soluble,conjugated,polythiophene,单链,single,stranded,ssDNA,颜色变化,变化检测,转基因产品,耐除草剂,草甘膦,抗性基因,bp,引物,条带,碱基,基数,最优组合,裸眼,射下,橘红色,橙黄色,检出限,拷贝,个检,检测过程,恒温加热
AB值：
0.34004
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