典型文献
不同结构的DNA激活序列对Cas12a反式切割活性的影响
文献摘要：
CRISPR-Cas12a系统的反式切割活性在其识别特定的DNA激活序列后被激活,这不仅能实现特定DNA靶标的直接定量分析,同时也为构建针对多种生物标志物的体外传感体系带来了新的思路.然而,已有文献中所采用的双链DNA(dsDNA)和单链DNA(ssDNA)激活序列结构多种多样,缺乏全面、系统的设计指导原则.针对该问题,该文系统研究了不同结构的DNA激活序列对LbaCas12a反式切割活性的影响.通过对比研究,得出以下结论:(1)前间区序列邻近基序(PAM)位点有助于LbaCas12a更高效地靶向结合dsDNA激活序列和ssDNA激活序列;(2)PAM近端区域缺少序列片段会降低Cas12a-crRNA定位激活序列的效率;(3)删除PAM远端序列片段有利于增强LbaCas12a的反式切割活性;(4)由于省略了dsDNA解链过程,ssDNA激活序列在激活LbaCas12a的反式切割活性方面普遍比dsDNA激活序列产生的效果更好.根据这些发现,该文提出了一种LbaCas12a所青睐的高效激活序列结构,其激活的LbaCas2a反式酶切活性较采用含PAM位点的标准dsDNA激活序列高出3.7倍.研究结果为构建基于CRISPR-Cas12a的高效体外生物传感系统提供了重要支撑.
文献关键词：
Cas12a;前间区序列邻近基序(PAM);双链DNA激活序列;单链DNA激活序列;体外传感
中图分类号：
作者姓名：
费心蕊;刘晓玲;刘成辉
作者机构：
应用表面与胶体化学教育部重点实验室,陕西省生命科学分析化学重点实验室,陕西师范大学化学化工学院,陕西 西安 710119
文献出处：
引用格式：
[1]费心蕊;刘晓玲;刘成辉-.不同结构的DNA激活序列对Cas12a反式切割活性的影响)[J].分析测试学报,2022(04):610-617
A类：
体外传感,LbaCas12a,LbaCas2a
B类：
反式切割,切割活性,CRISPR,靶标,生物标志物,系带,双链,dsDNA,单链,ssDNA,序列结构,多种多样,指导原则,基序,PAM,近端,crRNA,删除,远端,省略,解链,效体,生物传感,传感系统
AB值：
0.21555
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