背景:PDHA1基因是有氧呼吸链中不可或缺的基因,血管内皮细胞的能量代谢与很多疾病有关.构建血管内皮细胞PDHA1基因敲除鼠,有助于研究能量代谢在血管内皮细胞相关疾病中的作用.目的:繁育血管内皮细胞PDHA1基因特异性敲除小鼠并进行表型鉴定.方法:将PDHA1(iΔEC/iΔEC)小鼠与PDHA1(iΔEC/-)小鼠进行合笼繁育,获得更多的PDHA1(iΔEC/iΔEC)小鼠进行后续实验.利用PCR和琼脂糖凝胶电泳进行基因鉴定,然后利用RT-PCR和Western blot检测敲除PDHA1后与能量代谢相关基因的mRNA及蛋白表达,利用VE-Cadherin与PDHA1双重免疫荧光判断PDHA1基因条件性敲除后PDHA1蛋白表达变化.结果 与结论:利用琼脂糖凝胶电泳实验成功检测出子代小鼠基因型,包括PDHA1(iΔEC/iΔEC)15只和PDHA1(iΔEC/-)2只小鼠;RT-PCR和Western Blot检测发现PDHA1在转录水平和翻译水平都发生了下降,参与糖酵解途径的HK2蛋白及mRNA表达上升,参与有氧磷酸化途径方向IDH蛋白及mRNA表达下降;VE-cadherin和PDHA1双重免疫荧光共染色检测到PDHA1的表达下降.

PDHA1基因;双重免疫荧光;CreERT2基因;表型验证;基因鉴定;能量代谢;血管内皮细胞;肺纤维化

郝玮;孙岳;杨安宁;刘太阳;宝瑞;刘耀阳;王秋实;王梦;畅思容;李媛媛;刘志宏

宁夏医科大学,公共卫生与管理学院,宁夏回族自治区银川市 750004;宁夏医科大学,基础医学院,宁夏回族自治区银川市 750004

中国组织工程研究

[1]郝玮;孙岳;杨安宁;刘太阳;宝瑞;刘耀阳;王秋实;王梦;畅思容;李媛媛;刘志宏-.血管内皮细胞PDHA1基因特异性敲除鼠构建及其表型功能鉴定)[J].中国组织工程研究,2022(20):3207-3211

血管内皮细胞,PDHA1,因特,特异性敲除,功能鉴定,有氧呼吸,细胞的能量,能量代谢,基因敲除,相关疾病,繁育,敲除小鼠,表型鉴定,EC,琼脂糖凝胶电泳,基因鉴定,blot,代谢相关基因,VE,Cadherin,双重免疫荧光,条件性敲除,表达变化,子代,基因型,Blot,转录水平,翻译水平,糖酵解途径,HK2,白及,磷酸化,IDH,cadherin,CreERT2,表型验证,肺纤维化

0.246215