[目的]克隆猪的 Microrchidia 家族 CW 锌指蛋白 2(Microrchidia family CW-type zinc finger 2,MORC2)基因,利用生物信息学手段分析其序列特征,并检测MORC2基因在猪不同组织中的表达情况和卵巢中的定位.[方法]以猪卵巢cDNA为模板扩增和克隆MORC2基因完整CDS区,并进行相似性比对及系统发育树构建;利用生物信息学软件对猪MORC2蛋白序列进行预测;使用实时荧光定量PCR检测MORC2基因在猪不同组织中的表达情况;利用免疫组化方法检测猪MORC2蛋白在猪卵巢中的定位情况.[结果]猪MORC2基因CDS区序列全长3 102 bp,编码1 033个氨基酸.猪MORC2蛋白氨基酸序列与人、黑猩猩、恒河猴、小鼠、牛、绵羊、鸡和斑马鱼的相似性分别为94.8％、94.6％、94.9％、91.9％、93.8％、93.9％、80.8％和64.3％.系统进化树表明,猪与灵长类亲缘关系最近,与反刍动物和啮齿类次之,与斑马鱼(鱼类)亲缘关系最远.猪MORC2蛋白分子质量为117.44 ku,理论等电点为8.16,半衰期为30 h,属于不稳定蛋白.MORC2蛋白的平均疏水性为-0.736,为亲水性蛋白,不含跨膜结构和信号肽.猪MORC2蛋白有174个磷酸化位点、81个糖基化位点;亚细胞定位属于核蛋白,细胞质次之,线粒体中有少量表达;含有经典的MORC蛋白家族结构:GHKL-ATPase、zf-CW和CC结构域.组织表达谱结果显示,MORC2基因在猪各组织中广泛表达,其中在肝脏中表达量最多,显著高于其他组织(P＜0.05),在心脏、肺脏和肌肉中表达量较少,显著低于其他组织(P＜0.05).免疫组化结果显示,MORC2蛋白在健康猪卵泡颗粒细胞和膜细胞中均有表达且表达量较高,在闭锁的卵泡颗粒细胞和膜细胞中表达量较少.[结论]试验成功获得猪MORC2基因完整CDS区序列,该基因在猪各组织中广泛表达,MORC2蛋白主要在健康猪的卵泡颗粒细胞和膜细胞中表达.研究结果为进一步研究MORC2蛋白调控猪卵巢发育和卵泡闭锁的分子机制提供理论依据.

猪;MORC2基因;克隆;表达;定位

齐南南;钱永航;罗刚;司徒旭祺;刘吉英

江苏科技大学生物技术学院,镇江212018

中国畜牧兽医

[1]齐南南;钱永航;罗刚;司徒旭祺;刘吉英-.猪MORC2基因克隆、生物信息学分析及组织表达定位)[J].中国畜牧兽医,2022(07):2431-2441

Microrchidia,MORC,GHKL,猪卵泡颗粒细胞

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