[目的]研究牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhea virus,BVDV)E0和E2串联基因重组腺病毒作为基因工程疫苗的应用潜力.[方法]采用PCR扩增、E0-E2基因融合并构建重组穿梭质粒pDC316-E0-E2,将其与AdMax腺病毒系统的骨架质粒共转染HEK293T细胞包装成重组腺病毒,通过Western blotting进行验证,并通过Reed-Muench法测定病毒滴度,通过肌内、皮下免疫接种小鼠后用ELISA方法及流式细胞检测进行免疫效果试验.[结果]成功扩增到E0、E2基因目的片段,大小分别为681和1 122 bp,得到了完整的腺病毒Ad5-E0-E2;测定其滴度为1.1×1010 PFU/mL;Western blotting检测结果显示,Ad5-E0-E2外源基因在HEK293T细胞中表达,得到了与预期相符的目的条带(65 ku);ELISA检测结果表明,通过肌内和皮下注射Ad5-E0-E2均能产生较高的抗体水平;流式细胞检测显示首免、二免后肌内和皮下注射Ad5-E0-E2组CD4+、CD4+/CD8+比值均极显著高于PBS对照组(P＜0.01).[结论]本试验成功构建重组腺病毒Ad5-E0-E2,且具有较好的反应原性和免疫原性,能诱导机体产生针对BVDV的特异性抗体.

牛病毒性腹泻病毒(BVDV);基因融合;腺病毒

任杰;林泠;汤德元;曾智勇;王彬;禹光美;郑如雯;吴道义;黄涛

贵州大学动物科学学院,贵阳550025;毕节市畜牧兽医科学研究所,毕节551700

中国畜牧兽医

[1]任杰;林泠;汤德元;曾智勇;王彬;禹光美;郑如雯;吴道义;黄涛-.牛病毒性腹泻病毒E0-E2基因融合腺病毒的构建及小鼠免疫效果评价)[J].中国畜牧兽医,2022(06):2056-2063

AdMax

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