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蛋白重组技术在制备视黄醇结合蛋白质控品和候选参考物质中的方法研究
文献摘要：
目的:通过蛋白重组技术低成本、快速制备高浓度人视黄醇结合蛋白4（hRBP4）参考物质，解决临床hRBP4高值参考物质难以获取的需求。方法:在美国国立生物技术信息中心NCB查找hRBP4的互补DNA序列，经大肠埃希菌密码子优化后人工合成，然后将DNA片段克隆至原核表达质粒pET-28a（+）中，以构建重组hRBP4表达载体。将重组质粒转化至
E. coli BL21感受肽中，优化诱导表达条件（如温度、转速和异丙基硫代半乳糖苷IPTG浓度等）、诱导质粒表达并对重组蛋白进行His融合标签纯化，获取纯化后的hRBP4重组蛋白。
结果:DNAMAN软件对比显示编码hRBP4蛋白的碱基序列完全正确，成功构建重组hRBP4原核表达质粒；SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳结果显示亲和纯化产物中可清晰可见约相对分子质量26 000电泳条带；临床尿液和血清hRBP4常规检测系统均可检测到纯化的hRBP4蛋白，且稀释倍数与检测浓度间呈现良好线性关系。结论:成功构建重组hRBP4高水平表达系统，重组hRBP4蛋白纯度大、浓度高、生产周期短，有望在室间质量评价质控品和有证参考物质研制中发挥重要作用。
文献关键词：
视黄醇结合蛋白质类;重组蛋白;参考物质;质控品;室间质量评价
中图分类号：
作者姓名：
张超;周伟燕;张江涛;汪静;张传宝
作者机构：
北京医院 国家老年医学中心 国家卫生健康委临床检验中心 中国医学科学院老年医学研究院，北京100730
文献出处：
引用格式：
[1]张超;周伟燕;张江涛;汪静;张传宝-.蛋白重组技术在制备视黄醇结合蛋白质控品和候选参考物质中的方法研究)[J].中华检验医学杂志,2022(11):1131-1135
A类：
hRBP4,视黄醇结合蛋白质类
B类：
重组技术,质控品,参考物质,快速制备,值参,立生,生物技术,信息中心,NCB,大肠埃希菌,密码子优化,人工合成,原核表达,pET,28a,表达载体,重组质粒,coli,BL21,诱导表达,异丙基,半乳糖,糖苷,IPTG,重组蛋白,His,融合标签,DNAMAN,软件对比,碱基序列,完全正确,SDS,聚丙烯酰胺凝胶电泳,亲和纯化,纯化产物,清晰可见,相对分子质量,电泳条带,尿液,常规检测,倍数,表达系统,蛋白纯度,生产周期,周期短,室间质量评价
AB值：
0.297122
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