典型文献
VP35蛋白对Ⅱ型草鱼呼肠孤病毒增殖的影响
文献摘要：
Ⅱ型草鱼呼肠孤病毒(GCRV)基因片段S11编码外衣壳蛋白VP35.为深入探究VP35蛋白在病毒增殖中发挥的作用,实验扩增了S11基因并插入载体pCMV-3×flag中,构建pCMV-3×flag-S11真核表达质粒,转染草鱼肾细胞(CIK)后感染Ⅱ型GCRV,收集感染后的上清液与细胞.首先利用实时荧光定量PCR中相对定量的方法检测细胞样品中Ⅱ型GCRV-S6基因的mRNA.结果显示,过表达VP35在病毒mRNA水平促进Ⅱ型GCRV的增殖;然后扩增S6基因并插入到载体pET-32a(+)中,构建重组原核表达质粒,纯化Ⅱ型GCRV-VP4蛋白并制备多克隆抗体,用Western blot检测收集的细胞样品中的VP4蛋白,结果表明过表达VP35在病毒蛋白水平促进Ⅱ型GCRV的增殖;最后使用pET-32a-S6质粒作为阳性标准质粒并制作标准曲线,建立Ⅱ型GCRV病毒基因拷贝数的绝对定量检测方法,利用该方法检测细胞上清液中的病毒颗粒,结果表明过表达VP35增加Ⅱ型GCRV病毒拷贝数.本研究从3个维度证明过表达VP35蛋白促进Ⅱ型GCRV增殖,有助于深入解析VP35蛋白功能,也为进一步探究Ⅱ型GCRV的致病机制提供理论基础.
文献关键词：
草鱼;Ⅱ型草鱼呼肠孤病毒;VP35蛋白;VP4蛋白;多克隆抗体;增殖
中图分类号：
作者姓名：
姜霖;涂加钢;张永安
作者机构：
华中农业大学水产学院,农业微生物学国家重点实验室,湖北武汉 430070
文献出处：
引用格式：
[1]姜霖;涂加钢;张永安-.VP35蛋白对Ⅱ型草鱼呼肠孤病毒增殖的影响)[J].水产学报,2022(02):261-269
A类：
VP35
B类：
草鱼呼肠孤病毒,病毒增殖,GCRV,S11,外衣,衣壳蛋白,pCMV,flag,真核表达质粒,转染,肾细胞,CIK,上清液,相对定量,S6,过表达,pET,32a,原核表达,VP4,多克隆抗体,blot,病毒蛋白,标准曲线,病毒基因,基因拷贝数,绝对定量检测,病毒颗,蛋白功能,致病机制
AB值：
0.231789
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