目的 探讨敲低3-磷酸甘油酸脱氢酶(PHGDH)靶向能量代谢对人骨肉瘤143B细胞恶性生物学行为及成骨分化的影响.方法 Real-time PCR及Western blotting检测PHGDH在成骨细胞hFOB1.19和不同恶性程度骨肉瘤细胞TE85、MG63、143B中的表达.采用脂质体转染法将短发夹RNA(shRNA)-PHGDH重组质粒转染至143B细胞中,Real-time PCR和Western blotting检测PHGDH的表达变化;结晶紫染色法、细胞计数法、CCK-8实验检测细胞增殖;划痕实验检测细胞平行迁移能力,Transwell实验检测细胞垂直迁移及侵袭能力;Annexin V-FITC/PI双染法、DAPI染色法检测细胞凋亡;碱性磷酸酶(ALP)染色和茜素红S染色检测成骨分化作用,Western blotting检测成骨分化指标Runt相关转录因子2(Runx2)、骨钙素(OC)的表达情况;Real-time PCR检测能量代谢相关基因葡萄糖转运蛋白1((GLUT1)、6-磷酸果糖激酶1(PFK1)、M2型丙酮酸激酶(PKM2)、乳酸脱氢酶A(LDHA)的表达,乳酸检测试剂盒测定乳酸分泌量,三磷酸腺苷(ATP)检测试剂盒检测ATP产生量.结果 PHGDH在143B细胞中的表达明显高于在hFOB1.19、MG63和TE85细胞中(P＜0.01);转染shRNA-PHGDH重组质粒使143B细胞中的PHGDH表达量降低(P＜0.01)、增殖能力降低(P＜0.01)、细胞迁移及侵袭能力减低(P＜0.01)、凋亡率增高(P＜0.01)、ALP染色阳性率增加(P＜0.01)、茜素红染色阳性率增加(P＜0.05)、Runx2(P＜0.05)和OC的表达增高(P＜0.01)、能量代谢相关基因(GLUT1、PFK1、PKM2、LDHA)的表达下调(P＜0.01)、乳酸减少(P＜0.01)、ATP 增多(P＜0.05).结论 敲低 PHGDH可通过能量代谢抑制人骨肉瘤143B细胞增殖、迁移、侵袭,促进其凋亡,并促进其成骨分化.

3-磷酸甘油酸脱氢酶;能量代谢;骨肉瘤;成骨分化;实时定量聚合酶链反应;人

周红;康权;谢圣男;陈洁;石雨鹭;罗庆

重庆医科大学附属儿童医院儿科研究所,儿童发育疾病研究教育部重点实验室,国家儿童健康与疾病临床医学研究中心,儿童发育重大疾病国家国际科技合作基地,儿科学重庆市重点实验室,重庆 400014;重庆医科大学附属儿童医院普通外科创伤外科,重庆 400014

解剖学报

[1]周红;康权;谢圣男;陈洁;石雨鹭;罗庆-.敲低3-磷酸甘油酸脱氢酶靶向能量代谢逆转骨肉瘤恶性生物学的行为)[J].解剖学报,2022(04):488-497

TE85

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