典型文献
蔗糖异构酶PalI在解脂耶氏酵母中的表面展示
文献摘要：
[背景]蔗糖异构酶(PalI)生物转化蔗糖是目前生产异麦芽酮糖的主要方法,但在生产过程中存在的蔗糖异构酶转化蔗糖副产物比例较高、游离酶需要分离纯化等问题限制了异麦芽酮糖工业生产的应用.[目的]构建蔗糖异构酶PalI在解脂耶氏酵母(Yarrowia lipolytica)Po1g中的表面展示菌株,以降低蔗糖异构酶转化蔗糖的副产物比例及其纯化成本.[方法]为获得具有生产PalI能力的Y.lipolytica Po1g表面展示菌株,通过重叠延伸PCR将克雷伯氏菌(Klebsiella singaporensis)LX3的PalI的编码基因PalI与全基因合成的来自Y.lipolytica细胞壁的锚定蛋白Pir1融合,转入Y.lipolytica Po1g中构建表面展示菌株.利用3,5-二硝基水杨酸(3,5-dinitrosalicylic acid,DNS)比色定糖法测定表面展示的PalI酶活力并对其酶学性质进行探究,通过高效液相色谱法分析其转化蔗糖的产物.[结果]构建了蔗糖异构酶表面展示菌株Pir1-PalI/Po1g,经DNS法测得展示在 Y.lipolytica Po1g表面的 PalI 酶活力为(4 694.6±56.6)U/g-菌体干重(dry cell weight,DCW),该酶的最适反应温度及pH值分别为45℃和pH 6.0,在20-55℃,pH 3.5-9.0区间内较稳定.对该酶转化蔗糖产物进行分析,结果表明以异麦芽酮糖为主的二糖产物与单糖副产物的比例可达到91∶9.[结论]本研究构建了表面展示PalI的Y.lipolytica Po1g菌株,为异麦芽酮糖的工业化生产奠定了基础.
文献关键词：
蔗糖异构酶;解脂耶氏酵母;表面展示系统;酵母细胞壁锚定蛋白Pir1;酶学性质
中图分类号：
作者姓名：
吴琦;黄思敏;郭小宇;李宪臻;刘家豪;陈慧玲;李思彭
作者机构：
大连工业大学生物工程学院微生物资源与催化实验室,辽宁大连116033
文献出处：
引用格式：
[1]吴琦;黄思敏;郭小宇;李宪臻;刘家豪;陈慧玲;李思彭-.蔗糖异构酶PalI在解脂耶氏酵母中的表面展示)[J].微生物学通报,2022(08):3094-3106
A类：
PalI,Po1g,singaporensis,Pir1
B类：
蔗糖异构酶,解脂耶氏酵母,生物转化,前生,异麦芽酮糖,主要方法,酶转化,副产物,分离纯化,Yarrowia,lipolytica,克雷伯氏菌,Klebsiella,LX3,编码基因,全基因,基因合成,锚定蛋白,转入,建表,硝基,水杨酸,dinitrosalicylic,acid,DNS,比色,酶活力,酶学性质,高效液相色谱法,菌体,干重,dry,cell,weight,DCW,反应温度,二糖,单糖,研究构建,工业化生产,表面展示系统,酵母细胞壁
AB值：
0.235986
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