典型文献
稳定表达猪CD163受体的MARC-145细胞系的构建
文献摘要：
为了构建稳定表达猪CD163(pCD163)受体的MARC-145细胞系,从猪肺泡巨噬细胞(PAMs)中提取总RNA,通过RT-PCR方法扩增pCD163基因,将pCD163基因克隆到慢病毒载体pLVX-IRES-mCherry中,获得重组质粒pLVX-pCD163-IRES-mCherry.将重组质粒 pLVX-pCD163-IRES-mCherry 与辅助质粒 psPAX2、VSVG 共转染293T细胞,获得具有感染能力的慢病毒粒子,使用慢病毒感染MARC-145细胞,用嘌吟霉素初步筛选阳性细胞,采用终点稀释法筛选出稳定表达pCD163受体的MARC-145细胞.通过RT-PCR扩增pCD163基因及测序分析表明细胞系基因组中存在pCD163受体编码序列,IFA和Western blot试验验证了 pCD163受体蛋白在细胞系中稳定表达.用不同谱系的猪繁殖与 呼吸综合征病毒(PRRSV)GXNN1396(lineage 8)、GXNN202004a(lineage 1)、GXGG202007(lineage 3)分别感染稳定表达pCD163的MARC-145细胞系与MARC-145细胞,PRRSV毒株在表达pCD163的MARC-145细胞系中能够更快达到最高病毒滴度.结果表明,成功构建了稳定表达pCD163的MARC-145 细胞系,为快速分离各种谱系PRRSV毒株和相关研究奠定了基础.
文献关键词：
猪CD163受体;细胞系;慢病毒载体
中图分类号：
作者姓名：
吕静;刘文波;刘畅;任同伟;陈樱;欧阳康;黄伟坚;韦祖樟
作者机构：
广西大学动物科学技术学院,广西南宁 530005
文献出处：
引用格式：
[1]吕静;刘文波;刘畅;任同伟;陈樱;欧阳康;黄伟坚;韦祖樟-.稳定表达猪CD163受体的MARC-145细胞系的构建)[J].中国兽医学报,2022(03):529-534
A类：
pCD163,GXNN1396,GXNN202004a,GXGG202007
B类：
稳定表达,MARC,细胞系,猪肺泡巨噬细胞,PAMs,基因克隆,慢病毒载体,pLVX,IRES,mCherry,重组质粒,psPAX2,VSVG,共转染,293T,有感,慢病毒感染,嘌吟,初步筛选,阳性细胞,稀释法,测序分析,明细,编码序列,IFA,blot,受体蛋白,猪繁殖,PRRSV,lineage,毒株,病毒滴度,快速分离
AB值：
0.247629
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