目的:探讨核因子E2相关因子2(Nrf2)对小鼠神经干细胞(NSCs)增殖和分化能力的影响.方法:分离新生小鼠海马组织,培养NSCs,采用电穿孔法将Nrf2 siRNA序列转染至NSCs,分别用real time RT-PCR和Western Blot检测敲减效率;运用BrdU掺入实验、Tuj1免疫荧光染色和CCK-8法检测Nrf2靶向siRNA对NSCs的增殖、分化能力和细胞活力的影响.通过脑立体定位技术,在成年小鼠海马部位注射Nrf2抑制剂Brusatol,应用Western Blot检测Nrf2的蛋白表达水平;通过Ki67、DCX免疫荧光染色检测下调Nrf2对海马神经发生的影响.利用活性氧簇(ROS)水平测定法和real time RT-PCR分别检测活性氧水平和氧化应激相关通路超氧化物歧化酶(SOD1和SOD2)的表达.结果:Nrf2的siRNA序列转染至NSCs,real time RT-PCR结果显示siRNA的敲减效率为(54.56±7.05)％(P＜0.01),Western Blot 结果显示 siRNA 的敲减效率为(39.50±7.90)％(P＜0.01);与NC-siRNA组相比,Nrf2-siRNA组的BrdU阳性率、细胞活力均下降(P＜0.01),1％胎牛血清诱导分化后,Nrf2-siRNA 组 Tuj1 阳性率下降(P＜0.01);同时 Nrf2-siRNA 组 SOD1 和 SOD2的 mRNA 水平均较 NC-siRNA组下降(P＜0.05),而ROS水平较NC-siRNA组升高(P＜0.05).脑内注射Nrf2抑制剂Brusatol后,与Control组相比,Brusatol组的海马组织Nrf2蛋白表达水平降低(P＜0.01);Brusatol组Ki67阳性、DCX阳性细胞数量均减少(P＜0.05和 P＜0.01);此外 Brusatol 组 SOD1 mRNA 和 SOD2水平均较 Control 组下降(P＜0.05),而 ROS 水平较Control组升高(P＜0.05).结论:Nrf2基因敲减导致NSCs氧化应激水平升高,进而抑制了 NSCs增殖和分化能力.

核因子E2相关因子2;小分子RNA;神经干细胞;小鼠

刘姣;李瑞婷;杨娜;赵云鹤;陆利

山西医科大学人体解剖学教研室,太原030001

神经解剖学杂志

[1]刘姣;李瑞婷;杨娜;赵云鹤;陆利-.Nrf2靶向siRNA对小鼠神经干细胞增殖和分化能力的影响)[J].神经解剖学杂志,2022(02):201-208

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