目的 探讨C3H1型锌指结合蛋白36(ZFP36L1)介导的星形胶质细胞活化在肌萎缩侧索硬化症(ALS)运动神经元退变中的作用.方法 以铜锌超氧化物歧化酶1(SOD1)-G93A转基因小鼠作为动物模型,同窝野生型小鼠作为对照(突变型及野生型小鼠各时间点分别取13只小鼠);Real-time PCR、Western blotting检测小鼠发病早期、中期及晚期脊髓内ZFP36L1 mRNA及蛋白变化,免疫荧光染色检测ZFP36L1在脊髓内的表达及分布;出生后1～2 d新生小鼠15只,建立SOD1-G93A突变型原代星形胶质细胞模型,Real-time PCR、Western blotting检测星形胶质细胞内ZFP36L1 mRNA及蛋白水平的变化,si-ZFP36L1转染SOD1-G93A突变型原代星形胶质细胞,Western blotting检测转染效率,Western blotting及ELISA检测转染后星形胶质细胞分泌炎性因子肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素18(IL-18)变化;沉默SOD1-G93A突变型原代星形胶质细胞内ZFP36L1后,与SOD1-G93A突变型NSC34细胞共培养,通过5'-乙炔基-2'-脱氧尿苷(EdU)实验和观察增殖细胞核抗原(PCNA)的水平明确ZFP36L1对NSC34细胞增殖的影响,通过TUNEL实验及观察剪切Caspase-3(cleaved-Caspase-3)的水平明确ZFP36L1对NSC34细胞凋亡的影响,以转染空白小干扰RNA(siRNA)作为对照组.结果 与野生型小鼠相比,ZFP36L1在SOD1-G93A转基因小鼠脊髓组织内mRNA及蛋白水平均下调,在野生型小鼠脊髓组织内,ZFP36L1主要与β-微管蛋白Ⅲ(β-tubulinⅢ)阳性的神经元共表达,而SOD1-G93A突变型小鼠的脊髓组织内,ZFP36L1在神经元内表达减弱,与胶质纤维酸性蛋白(GFAP)标记的星形胶质细胞共表达明显增加;SOD1-G93A突变型原代星形胶质细胞内ZFP36L1表达增加,si-ZFP36L1能明显降低SOD1-G93A突变型原代星形胶质细胞内ZFP36L1水平;沉默ZFP36L1后星形胶质细胞分泌炎性因子TNF-α、IL-18明显降低.此外,沉默ZFP36L1后,SOD1-G93A突变型原代星形胶质细胞能显著增强NSC34细胞增殖活性,抑制NSC34细胞凋亡.结论 在ALS发病过程中,星形胶质细胞被激活,ZFP36L1通过星形胶质细胞分泌的炎性因子促进了 ALS运动神经元的退变.

肌萎缩侧索硬化症;C3H1型锌指结合蛋白36;炎性因子;运动神经元;星形胶质细胞;免疫荧光;转基因小鼠

丁康;张烽萍;齐高秀;林盟;陈敏;陈燕春;郭章玉;周风华;管英俊

潍坊医学院基础医学院临床病理系;山东省神经疾病与再生修复重点实验室,山东潍坊 261053;潍坊医学院附属医院病理科;潍坊医学院基础医学院组织学与胚胎学教研室

解剖学报

[1]丁康;张烽萍;齐高秀;林盟;陈敏;陈燕春;郭章玉;周风华;管英俊-.C3H1型锌指结合蛋白36介导的星形胶质细胞活化在肌萎缩侧索硬化症运动神经元退变中的作用)[J].解剖学报,2022(03):273-280

C3H1,ZFP36L1,NSC34

锌指结合蛋白,星形胶质细胞活化,肌萎缩侧索硬化症,运动神经元,退变,ALS,SOD1,G93A,转基因小鼠,动物模型,野生型,突变型,Real,blotting,脊髓,髓内,免疫荧光染色,出生后,新生小鼠,原代星形胶质细胞,细胞模型,转染效率,炎性因子,细胞共培养,乙炔基,脱氧尿苷,EdU,增殖细胞核抗原,PCNA,TUNEL,Caspase,cleaved,小干扰,siRNA,在野,微管蛋白,tubulin,共表达,胶质纤维酸性蛋白,GFAP,细胞增殖活性

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