目的 探讨乳腺癌细胞来源外泌体miR-181a-5p对恶病质肌肉萎缩的影响及可能机制.方法 小鼠乳腺癌细胞4T1、小鼠正常乳腺细胞HC11分别采用条件培养基培养并从中分离纯化外泌体,采用Western blot法检测4T1细胞、HC11 细胞外泌体肿瘤易感基因 101(tumor susceptibility gene 101,TSG101)、CD63、CD9、高尔基体基质蛋白(Golgi matrix protein,GM130)相对表达量,采用实时荧光定量PCR法检测miR-181a-5p相对表达量.小鼠成肌细胞C2C12分化为肌管细胞后分为对照组(正常培养)、条件培养基组(与4T1细胞培养基共培养)和细胞松弛素D(cytochalasin D,cytoD)组(胞吞抑制剂cytoD处理细胞后与4T1细胞培养基共培养),采用Western blot法检测肌球蛋白重链(myosin heavy chain,MHC)、肌萎缩蛋白-1(Atrogin-1)蛋白相对表达量.取人胚胎肾细胞HEK293T,采用荧光素酶报告基因实验验证 miR-181a-5p 与 N-myc 下游调节基因 2(N-myc downstream regulated gene 2,NDRG2)的靶向关系.C2C12 肌管细胞分为空白对照组(不进行转染)、miR-181a-5p过表达组(转染miR-181a-5p mimic)、阴性对照组(转染miR-NC)、NDRG2敲低组(转染NDRG2 siRNA),采用Western blot法检测4组细胞MHC、Atrogin-1、NDRG2蛋白相对表达量.结果 4T1细胞外泌体miR-181a-5p相对表达量(0.91±0.07)及TSG101、CD63、CD9蛋白相对表达量(1.51±0.03、1.46±0.08、1.43±0.06)均高于 HC11 细胞(0.40±0.04、0.83±0.08、0.79±0.43、0.70±0.03)(P＜0.05),GM130 蛋白相对表达量(0.46±0.03)低于HC11细胞(1.14±0.05)(t=17.160,P＜0.001).条件培养基组细胞MHC蛋白相对表达量(0.86±0.17)低于对照组(1.59±0.08)、cytoD 组(1.34±0.07)(P＜0.05),Atrogin-1 蛋白相对表达量(1.12±0.05)高于对照组(0.77±0.05)、cytoD 组(0.87±0.03)(P＜0.05);cytoD 组细胞 MHC、Atrogin-1 蛋白相对表达量与对照组比较差异均无统计学意义(P＞0.05).miR-181a-5p靶向NDRG2.miR-181a-5p过表达组、NDRG2敲低组细胞MHC(1.17±0.09、0.73±0.08)、NDRG2(0.73±0.06、0.59±0.05)蛋白相对表达量均低于阴性对照组(1.52±0.11、1.64±0.09)、空白对照组(1.86±0.07、1.37±0.06)(P＜0.05),Atrogin-1 蛋白相对表达量(0.99±0.06、0.89±0.08)均高于阴性对照组(0.49±0.03)、空白对照组(0.53±0.10)(P＜0.05);阴性对照组细胞MHC、Atrogin-1、NDRG2蛋白相对表达量与空白对照组比较差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 乳腺癌4T1细胞来源的外泌体miR-181a-5p靶向结合并下调NDRG2蛋白表达,加重C2C12肌管萎缩,促进恶病质进展.

乳腺癌;外泌体;miR-181a-5p;N-myc下游调节基因2;恶病质;肌肉萎缩;4T1细胞;C2C12细胞

陈文馨;皮美辰;孙圣荣

武汉大学人民医院乳腺甲状腺外科,湖北 武汉 430060

中华实用诊断与治疗杂志

[1]陈文馨;皮美辰;孙圣荣-.乳腺癌细胞来源外泌体miR-181a-5p对恶病质肌肉萎缩的影响)[J].中华实用诊断与治疗杂志,2022(10):1012-1016

HC11,cytoD

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