目的 探讨微RNA(miR)-133a-3p靶向调控转化生长因子-β1(TGF-β1)/Smad3对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖和凋亡的影响及机制.方法 选择2020年2月至2021年2月焦作市人民医院皮肤科收治的瘢痕疙瘩患者29例为研究对象,手术切取瘢痕疙瘩组织及其周围正常皮肤组织,分离培养瘢痕疙瘩成纤维细胞(KF)和正常皮肤组织成纤维细胞(NF).取对数生长期KF细胞,随机分为空白对照组、miR-阴性对照(NC)组、miR-133a-3p组、miR-133a-3p+pcDNA3.1组、miR-133a-3p+pcDNA3.1-TGF-β1组;空白对照组细胞不做任何转染,miR-NC组细胞转染miR-NC,miR-133a-3p组细胞转染miR-133a-3p mimic,miR-133a-3p+pcDNA3.1组细胞共转染miR-133a-3p mimic和pcDNA3.1,miR-133a-3p+pcDNA3.1-TGF-β1组细胞共转染miR-133a-3p mimic和pcDNA3.1-TGF-β1.实时荧光定量聚合酶链反应法检测组织和细胞中miR-133a-3p和Ⅰ型胶原蛋白(collagenⅠ)、Ⅲ型胶原蛋白(collagenⅢ)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)mRNA的表达,细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测细胞增殖活力,流式细胞术检测细胞凋亡情况.应用TargetScan数据库通过生物信息分析预测miR-133a-3p与TGF-β1的3'非翻译区(3'-UTR)存在结合位点,构建含有预测结合位点的野生型(Wt)和突变型(Mt)TGF-β13'-UTR片段的荧光素酶报告基因载体,分别将用脂质体2000包裹的Wt TGF-β1或Mt TGF-β1报告基因载体与miR-133a-3p mimics或miR-NC共转染入KF细胞,将转染后的细胞设为miR-NC+Wt TGF-β1组、miR-133a-3p+Wt TGF-β1组、miR-NC+Mt TGF-β1组、miR-133a-3p+Mt TGF-β1组,双荧光素酶检测试剂盒检测4组细胞双荧光素酶活性.Western blot检测空白对照组、miR-NC组、miR-133a-3p组KF细胞中TGF-β1、Smad3蛋白的相对表达量.结果 瘢痕疙瘩组织中miR-133a-3p相对表达量显著低于正常皮肤组织(t=18.988,P<0.05).KF细胞中miR-133a-3p相对表达量显著低于NF细胞(t=18.679,P<0.05).miR-133a-3p组细胞中miR-133a-3p相对表达量显著高于空白对照组和miR-NC组,CollagenⅠ、CollagenⅢ、α-SMA mRNA相对表达量显著低于空白对照组和miR-NC组(P<0.05);空白对照组与miR-NC组细胞中miR-133a-3p和CollagenⅠ、CollagenⅢ、α-SMA mRNA相对表达量比较差异无统计学意义(P>0.05).miR-133a-3p组细胞凋亡率显著高于空白对照组和miR-NC组,细胞增殖活力显著低于空白对照组和miR-NC组(t=13.912、14.227、-8.020、-6.947,P<0.05);空白对照组与miR-NC组细胞凋亡率、细胞增殖活力比较差异无统计学意义(t=-0.607、0.448,P>0.05).miR-133a-3p+Wt TGF-β1组细胞相对荧光素酶活性显著低于miR-NC+Wt TGF-β1组、miR-NC+Mt TGF-β1组、miR-133a-3p+Mt TGF-β1组(t=-15.729、-19.490、-16.186,P<0.05).miR-NC+Wt TGF-β1组、miR-NC+Mt TGF-β1组、miR-133a-3p+Mt TGF-β1组细胞相对荧光素酶活性两两比较差异均无统计学意义(t=-0.596、0.847、0.842,P>0.05).KF细胞中Smad3和TGF-β1蛋白相对表达量显著高于NF细胞(t=5.758、9.027,P<0.05).miR-133a-3p组细胞中Smad3和TGF-β1蛋白相对表达量显著高于miR-NC组(t=-4.913、-8.314,P<0.05).miR-133a-3p+pcDNA3.1-TGF-β1组细胞中CollagenⅠ、CollagenⅢ、α-SMA mRNA相对表达量和细胞增殖活力显著高于miR-133a-3p组和miR-133a-3p+pcDNA3.1组,细胞凋亡率显著低于miR-133a-3p转染组和miR-133a-3p+pcDNA3.1组(P<0.05).miR-133a-3p组与miR-133a-3p+pcDNA3.1组细胞中CollagenⅠ、CollagenⅢ、α-SMA mRNA相对表达量及细胞凋亡率和细胞增殖活力比较差异无统计学意义(P>0.05).结论 过表达miR-133a-3p可通过负调控TGF-β1抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖,促进细胞凋亡,提示miR-133a-3p/TGF-β1通路可能是瘢痕疙瘩治疗的一个新的靶点.

瘢痕疙瘩;微RNA-133a-3p;转化生长因子-β1;增殖;凋亡

卫艳萍;谢彤阳;王廷廷;张宁宁

焦作市人民医院皮肤科,河南 焦作 454002;新乡医学院研究生学院,河南 新乡 453003

新乡医学院学报

[1]卫艳萍;谢彤阳;王廷廷;张宁宁-.微RNA-133a-3p靶向调控转化生长因子-β1/Smad3对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖和凋亡的影响)[J].新乡医学院学报,2022(04):330-336,340

NC+Wt,3p+Wt,NC+Mt,3p+Mt

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