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罗湖病毒(TiLV)RT-qPCR方法的建立
文献摘要：
研究根据罗湖病毒(Tilapia lake virus,TiLV)编码RNA聚合酶的基因片段1设计1对特异性引物和探针,建立一种检测TiLV的实时荧光定量RT-PCR(RT-qPCR)方法,并对该检测方法进行了反应体系和条件优化.结果表明,优化的20μL反应体系:2×Probe RT-PCR Master Mix 10μL,QN Probe RT-Mix 0.2μL,5μmol/L的引物TiLV-qF、TiLV-qR、探针TiLV-qP各1μL,模板1μL,补充RNase-free water至20μL.优化的反应条件:反转录45℃20 min;预变性95℃5 min;扩增95℃15 s,60℃1 min,40个循环.荧光收集设置在60℃退火延伸时进行.本文建立的RT-qPCR方法检测TiLV的特异性好,重复性好,灵敏度高,灵敏度为2.5×10-8 ng/μL,可为TiLV的监测和预防提供技术支撑.
文献关键词：
罗湖病毒(TiLV);特异性引物;探针;实时荧光定量RT-PCR(RT-qPCR)
中图分类号：
作者姓名：
徐淑菲;朱黄鑫;曾韵颖;刘启霖;方成俊;林双庆;孔凡德
作者机构：
厦门海关技术中心, 福建 厦门361026;东山海关综合技术服务中心, 福建 漳州363401
文献出处：
引用格式：
[1]徐淑菲;朱黄鑫;曾韵颖;刘启霖;方成俊;林双庆;孔凡德-.罗湖病毒(TiLV)RT-qPCR方法的建立)[J].渔业研究,2022(02):154-161
A类：
Tilapia,qF
B类：
罗湖,TiLV,qPCR,究根,lake,virus,特异性引物,反应体系,条件优化,Probe,Master,Mix,QN,qR,RNase,free,water,反应条件,荧光收集,退火,灵敏度高
AB值：
0.280653
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