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Keratin 5-IRES-eGFP敲入的人胚胎干细胞系的构建
文献摘要：
目的 利用CRISPR/Cas9技术构建一种keratin 5-IRES-eGFP敲入的人胚胎干细胞(hESCs)系,为研究表皮基底角质形成细胞异常的皮肤病提供一种细胞模型.方法 构建针对目的基因keratin 5的sgRNA质粒及打靶Donor质粒,利用CRISPR/Cas9技术完成对keratin 5的定向切割,将IRES-eGFP敲入至keratin 5终止密码子上游,诱导hESCs分化为表达绿色荧光蛋白(GFP)的基底层角质形成细胞.结果 PCR及Sanger测序结果表明IRES-eGFP成功整合至hESCs细胞系的keratin 5终止密码子上游,分化培养后观察细胞形态与角质形成细胞系HaCat形态一致.免疫荧光染色验证hESCs分化获得的ES-KC细胞系稳定表达GFP与keratin 5.结论 成功制备了keratin 5-IRES-eGFP敲入的hESCs细胞系,并诱导hESCs成功分化出带有绿色荧光蛋白标记的基底层角质形成细胞.
文献关键词：
人胚胎干细胞;CRISPR/Cas9技术;角蛋白5;基底层角质形成细胞
中图分类号：
作者姓名：
郑雯;钟亚丹;王炫;刘慧婷;杨斌;刘军
作者机构：
南方医科大学皮肤病医院,广东 广州 510091;佛山市第一人民医院,广东 佛山 528010
文献出处：
引用格式：
[1]郑雯;钟亚丹;王炫;刘慧婷;杨斌;刘军-.Keratin 5-IRES-eGFP敲入的人胚胎干细胞系的构建)[J].皮肤性病诊疗学杂志,2022(04):299-304
A类：
基底层角质形成细胞
B类：
Keratin,IRES,eGFP,人胚胎干细胞,细胞系,CRISPR,Cas9,技术构建,keratin,hESCs,底角,皮肤病,细胞模型,目的基因,sgRNA,质粒,打靶,Donor,定向切割,终止密码子,Sanger,分化培养,后观,细胞形态,HaCat,免疫荧光染色,KC,稳定表达,功分,出带,绿色荧光蛋白标记,角蛋白
AB值：
0.249118
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